细胞内液泡系和线粒体活体染色.pptVIP

实验三细胞内液泡系和线粒体的活体染色 实验目的 定义及原理 操作程序 作业 返回大纲 一 实验目的 了解活体染色的定义及原理 熟悉液泡系和线粒体活体染色 的方法和步骤 掌握动植物细胞活体染色的原理和相关的技术 返回 二 定义及原理 所谓活体染色，是指利用某些无毒或毒性较小的染色剂显示出细胞内某些天然构造存在的真实性，而不影响细胞的生命活动，不产生任何物理化学变化以致引起细胞的死亡的染色方法。即在染色和观察过程中，细胞或组织始终 保持其生命状态。 活染法弥补了活观察法不能显示细胞精细结构的不足，也避免了固定染色法对细胞结构的破环和造成人为假象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色的染料较少，能显示出的结构和种类也不多。 二 定义及原理 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是将染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后者是取材后，对年离体的活细胞进行染色。为保持离体细胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常的温度，渗透压，PH等。 关于活染的机制，一般认为，线粒体能被健那绿-B染成兰色，是由线粒体内的细胞色素氧化酶使染料保持在氧化状态，即有色状态，而在周围的细胞质中，这些染料被还原成无色的色基，液泡系被中性红染色，则主要是染料的堆积作用。中性红为碱性染料，其胶粒表面带阳离子，被染部分具阴离子，它们彼此之间就发生了电吸附作用（静电吸附）。 返回 二 定义及原理 液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性红（neutral red）是液泡的特殊染色剂，只将液泡染成红色。在细胞处于生活状态时，细胞质和细胞核不被中性红染色。 线粒体是细胞内的一个重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。健那绿－B（Janus green B）对线粒体具有专一性的染色，是毒性最小的碱性染料。健那绿－B染色是由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色，而周围的细胞质被还原成无色的色基。 三 操作程序 用镊子撕取莴笋叶片下表皮细胞，置于中性红中染色10分钟。可见许多大小不同的液泡，有些液泡处于不断晃动之中。 三 操作程序 用解剖针破坏蛙的脊髓，然后把腹部皮肤剪开，使露出胸骨的剑突部分，剪取剑突软骨边缘最薄的部分一小块，放入载片中央的中性红染液中，染色10—30分钟，盖上盖玻片。用高倍镜观察，可见软骨细胞为椭圆形、细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方有许多被染成玫瑰红大小液泡，此区即液泡区。 三 操作程序 取蛙肝脏边缘一小块组织，放入生理盐水中洗涤去除血液，将肝组织置于滴有健那绿-B的载玻片上，用镊子镊或撕拉肝组织，然后将整快的肝组织移出，加盖玻片观察破碎的肝细胞。染色10min左右．可见玻片上有形状规则的椭圆形血细胞，形状不规则的近于方圆形的肝细胞及远远小于细胞的作不规则运动的线粒体。 三 操作程序 用镊子撕取玉树叶叶片下表皮，健那绿-B染色10分钟，可在细胞质中看到随细胞质环流而运动的被染成兰色的线粒体。 三 操作程序 用镊子撕取莴笋叶片下表皮细胞，置于中性红中染色10分钟。可见许多大小不同的液泡，有些液泡处于不断晃动之中。 用解剖针破坏蛙的脊髓，然后把腹部皮肤剪开，使露出胸骨的剑突部分，剪取剑突软骨边缘最薄的部分一小块，放入载片中央的中性红染液中，染色10—30分钟，盖上盖玻片。用高倍镜观察，可见软骨细胞为椭圆形、细胞核及核仁清楚易见，在细胞核的上方有许多被染成玫瑰红大小液泡，此区即液泡区。 取蛙肝脏边缘一小块组织，放入生理盐水中洗涤去除血液，将肝组织置于滴有健那绿-B的载玻片上，用镊子镊或撕拉肝组织，然后将整快的肝组织移出，加盖玻片观察破碎的肝细胞。染色10min左右．可见玻片上有形状规则的椭圆形血细胞，形状不规则的近于方圆形的肝细胞及远远小于细胞的作不规则运动的线粒体。 用镊子撕取玉树叶叶片下表皮，健那绿-B染色10分钟，可在细胞质中看到随细胞质环流而运动的被染成兰色的线粒体。 返回 作业 绘制中性红活染的液泡系图和健那绿-B活染的线粒体图,并作简要分析。 返回