复旦生物制药的讲义-发酵罐及灭菌方法.ppt

第三节 发酵设备及消毒灭菌 发酵罐基本类型 (1）搅拌釜反应器 （stirred tank reactor） (2）气泡柱式反应器 （bubble column) (3) 气升式生物反应器 （airlift reactor) 内管型；外管型 发酵设备及检测控制系统 ?? B|Braun公司 现代发酵工程规模 1、无菌空气系统 好气性发酵过程中需要大量的无菌空气，空气要作到 绝对无菌在目前是不可能的，也是不经济的。 发酵对无菌空气的要求是 ：无菌，无灰尘，无杂质，无水，无油，正压等几项指标； 发酵对无菌空气的无菌程度要求是：只要在发酵过程中不因无菌空气染菌，而造成损失即可。 在工程设计中一般要求1000次使用周期中只允许有一个菌通过，即经过滤后空气的无菌程度为N=10-3 培养基 培养基（culture medium)是人工配制的适合于不同微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。 碳源 氮源 无机盐及微量元素 前体、促进剂与抑制剂 培养基的类型 孢子培养基：供菌种繁殖孢子，常用固体培养基 种子培养基：提供大量优质的菌体，其配方上应适合于菌体生长于繁殖 发酵培养基：使微生物积累代谢产物，既要有利于生长繁殖，防止菌体过早衰老，又要有利于产物的大量合成。 2）实罐灭菌 将培养基置于发酵罐中用蒸汽加热，达到预定灭菌温度后，维持一定时间，再冷却到发酵温度，然后接种发酵，这叫做实罐灭菌，又称分批灭菌。 操作要点： 三路进汽：直接蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内直接加热，直到所规定的温度，并维持一定的时间。这就是所谓的“三路进气”。 3）连消 培养基成分 培养基的成分中，油脂、糖类、蛋白质都是传热的不良介质，会增加微生物的耐热性，使灭菌困难。 浓度较高的培养基相对需要较高温度和较长时间灭菌。 高浓度的盐类，色素则削弱其耐热性，故较易灭菌。 培养基中的颗粒物质 培养基中的颗粒物质大，灭菌困难，反之，灭菌容易。一般说来，含有颗粒对培养基灭菌影响不大，但在培养基混有较大颗粒，特别是存在凝结成团的胶体时，会影响灭菌效果，必须过滤除去。 第二部分：消毒与灭菌 消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂(disinfectant)。 灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。 防腐(antisepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌(asepsis)：不存在活菌。 加热设备：在配料罐里培养基被加热到70℃，然后，用泵送到加热设备，在20秒的时间内继续加热到130～140℃。常用的加热设备有塔式和喷射式两种。 塔式加热设备又称连消塔，塔的有效高度2～3m，料液在塔中的流速是0.1m／s，因此料液在塔内的滞留时间为2～30s。 喷射式加热器有一喷嘴，蒸汽由喷嘴喷出，料液从侧面进入加热器而被蒸汽加热。 ℃ 维持设备 维持设备使加热后的培养基保温—定的时间，从而达到灭菌的目的。 维持设备有两种：罐式和管式。罐式的是一个带有上下开口用于进出料的立式密封容器；管式的是用无缝钢管焊成，管内流速可取0.3～0.6m／s。 冷却设备 ①喷淋冷却器 ②套管冷却器 ③板式换热器 ④螺旋板换热器 4）影响培养基灭菌的因素 pH值的影响 pH值对微生物的耐热性影响很大，pH为6.0~8.0时微生物最不易死亡， pH 6.0时氢离子易渗入微生物的细胞内。 5）高温对培养基成分的有害影响及其防止 消除高温有害影响的措施 （1）采用特殊加热灭菌法 （2）对易破坏的含糖培养基进行灭菌时，应先将糖液与其他成分分别灭菌后再合并； （3）对含Ca2+或Fe3+的培养基与磷酸盐先作分别灭菌，然后再混合，就不易形成磷酸盐沉淀； （4）对含有在高温下易破坏成分的培养基（如含糖组合培养基）可进行低压灭菌（在112℃即0.57kg／cm2或8磅／英寸2下灭菌15分钟）或间歇灭菌； （5）在大规模发酵工业中，可采用连续加压灭菌法进行培养基的灭菌 3、管道及阀门 管道 ：与发酵罐连接的管道有水管、料管、空气管和蒸汽管; 发酵罐内的冷却蛇管与发酵罐内直接相连的料管等，最好采用不锈钢管。管径选取的流速是：上水管1～2m／s；料管0.5～1.0m／s；空气管10～15m／s；蒸汽15～20m／s。 阀门：阀门是发酵罐的重要组成，它被用于调节控制气体和液体的流量