第7章 亲和层析.pptVIP

第七章 亲和层析法 第一节 基本原理 生物亲和作用：生物物质具有识别特定物质并与该物质的分子相结合的能力。这种识别并结合的能力具有排他性（能区分结构和性质非常相近的其它分子）。 亲和层析(Affinity Chromatography，AC)是利用生物大分子具有对一类生物大分子特异识别和可逆结合的特性而建立起来的一种分离的色谱方法，也叫做生物亲和或生物特异性亲和色谱。 亲和作用的机理 1、结构特点（必要条件）：存在凹陷和凸起结构（钥匙和锁孔的关系） 2、相互作用力的存在 静电作用 氢键 疏水性相互作用 配位键 弱共价键 影响亲和作用的因素 1、离子强度：一般来说，提高离子强度，亲和作用减弱或完成破坏。 2、PH：在适当的PH下，亲和结合作用较高，在其它PH下，亲和作用减弱或完成破坏。 3、抑制氢键形成的物质：脲和盐酸胍的存在可减弱亲和作用 4、温度：提高温度，静电作用、氢键、配位键减弱；但是，疏水性相互作用增强 5、液体离子：SCN-、I-、CIO4-的存在，疏水性相互作用减弱 6、螯合剂：影响配位键，使亲和作用消失 1910年最早利用亲和纯化原理分离蛋白质(不溶性淀粉吸附淀粉酶)。 20世纪50年代有意识的利用。 1967年亲和纯化技术从理论走向实用(BrCN活化法修饰糖类载体用以偶联伯胺类化合物)。