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血清CK及其同工酶测定 检验系生化 一、概述 肌酸激酶（Creatine kinase，CK，EC2.7.3.2）全称腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸转移酶，催化肌酸（Cr）和ATP或磷酸肌酸（CrP）和ADP之间磷酸转移的可逆反应。 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP+H+ 偏碱pH有利于顺向反应进行，中性pH倾向逆向反应，一般逆向反应较顺向反应快2~6倍； Mg2+是CK 的必需激活剂，但过量反而抑制； 样品宜用血清或肝素化血浆； 标本应避免严重溶血； 血清中CK较不稳定，室温4h或4℃12h可使酶失活。 二、CK测定方法 比色法 紫外分光光度法 荧光法 比色法 利用顺向反应 1、测磷法 CrP在酸液中易水解成Cr及无机磷酸。（ATP与ADP在酸性条件下较稳定） 2、酶偶联-丙酮酸测定法 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+2，4-二硝基苯肼 丙酮酸-2，4-二硝 基苯腙 ☆顺向反应测定CK的底物较便宜； ☆测磷法的试剂较易得而稳定； ☆丙酮酸激酶价格较贵，不易获得； ☆顺向反应速度较慢，灵敏度较低。 利用逆向反应 CrP+ADP Cr+ATP Cr+双乙酰+α-萘酚 红色化合物 Mg2+作激活剂； 半胱氨酸供给巯基； 氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反应。 逆向反应的速度较快，敏感性较高，成为目前国内推荐的主要方法。 必须用中性或偏碱的蛋白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr。 紫外分光光度法 多利用逆向反应，是国际最常用方法 CrP+ADP Cr+ATP ATP+Glu ADP+6-P-Glu 6-P-Glu+NADP+ 6-P-GA+NADPH+H+ 全部反应最适pH为6.8~6.9； 主要干扰因素 ①谷光甘肽还原酶 ②腺苷酸激酶 荧光法 利用逆向反应生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反应产生荧光复合物，测其荧光强度，经与同样处理的Cr标准管比较，可计算CK活力。 优点：快速、敏感，巯基化合物不产生干 扰，试剂易得，操作条件易于掌握。 缺点：需精密荧光分光光度计，不适宜基 层单位使用。 酶偶联-丙酮酸测定法步骤（顺向反应） 计算：Au/As×200U/L 三、血清CK同工酶测定 方法：琼脂糖凝胶电泳法。 * * CK CK 丙酮酸激酶 CK CK 己糖激酶 G-6-PD 4 4 4 0.4N NaOH 室温5min，440nm比色 37℃，15min 0.5 0.5 0.5 DNP 37℃，10min 0.5 0.5 0.5 酶试剂 0.1 标准 0.1 血清 0.1 H2O 测定 标准 空白
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