实验三葡聚糖凝胶柱层析纯化蛋白质.pptVIP

实验二、葡聚糖凝胶柱层析 1、目的与要求： 　1.1、学习凝胶(Gel)层析法的基本原理； 　1.2、掌握葡聚糖凝胶（Sephadex）柱层　　　析的操作技术。 2、概述及原理： 　凝胶　　是一类不溶于水，在水中却有较大膨胀度和较好的分子筛功能，具有立体网状结构的物质（如葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等）。 2.1、能用于层析的凝胶主 要有下面几种： 　目前主要有葡聚糖凝胶（商品名为Sephadex），天然琼脂糖凝胶（商品名为Sapharose）、聚丙烯酰胺凝胶（商品名为Bio-Gel），其后还发展了凝胶的各种衍生物，如羧甲基-交联葡聚糖（CM-Sephadex），二乙基氨乙基-交联葡聚糖（DEAE- Sephadex）等种类。 交联葡聚糖凝胶 ： 　是凝胶层析法中使用最广泛的一类层析凝胶，商品名称：Sephadex。其基本骨架是葡聚糖，它是由右旋葡萄糖残基通过α－1，6糖苷键连接而成，葡聚糖分子之间通过醚桥（甘油基）交联形成三维空间网状结构 2.2、不同型号的葡聚糖凝胶　(Sephadex) 的选用原则： 　　 组别分离时，Sephadex G－25最为常用。例如样品中缓冲液的更换，蛋白质的脱盐 ； 分级分离时（如多蛋白质组分样品的分离纯化），应根据待分离样品中各组分的分子量大小和分子量分布范围来确定型号。 　 2.3、凝胶层析法