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植物组织培养的培养基 定义:含有一定营养成分,供植物组织培养生长的基质 无机营养成分:C,H,O大量元素及部分微量元素 有机营养成分 ① 含N物质:包括维生素和氨基酸 ② 碳源:2%—5%的蔗糖 ③ 琼脂:起支持作用 ④ 激素:生长素,细胞分裂素等 PH值:5.0-6.0 思考:如果两种来源不同的原生质体发生了融合,若只考虑两两融合,可形成几种融合细胞?下一步该做何处理? 脱分化和再分化的比较 不同细胞的全能性差异: 植物细胞 动物细胞 受精卵(全能性) 生殖细胞 体细胞 分化程度低的细胞全能性高 生长素用量/细胞分裂素用量,比值高时,有利于根的分化、抑制芽的形成;比值低时,有利于芽的分化,抑制根的形成;比值适中时,促进愈伤组织的生长。 激素用量的比例影响实验结果: 总结植物组织培养的条件: 无菌条件 营养物质(水、无机盐、蔗糖、氨基酸和有机酸等) 植物激素(如细胞分裂素、生长素等) 一定的外界条件(适宜的温度和pH等) 1.你认为两个来自不同植物的体细胞完成融合,遇到的第一个障碍是什么? 细胞壁 2.有没有一种温和的去壁方法呢? 酶解法 (纤维素酶、果胶酶等) 利用电激法将野生马铃薯与栽培马铃薯进行细胞融合 原生质体融合的方法: 物理法:离心、振动、电激等 化学法:聚乙二醇(PEG) 为什么两个原生质体能发生融合,这与细胞膜的什么特性有关? 细胞膜的流动性 3种、筛选融合细胞 * 简述蛋白质工程的基本途径 基因工程的实质 基因工程的不足、天然蛋白质的不足 蛋白质工程的基础 蛋白质工程的实质或者手段 回顾旧知 ? 克隆羊的全过程 白面羊乳腺细胞的细胞核 黑面羊卵细胞的细胞质 融合 新的细胞 黑面代孕母羊 白面羊的克隆羊 体外培养 一段时间 细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法,通过细胞水平或细胞器水平上的操作,按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。 一、细胞工程: 1、概念: 细胞工程 植物细胞工程 动物细胞工程 花瓣 愈伤组织 植物体 脱分化 再分化 细胞分裂素 生长素 有机物 无机盐 水分 试管苗 植物细胞工程常用的技术手段: 植物组织培养技术和植物体细胞杂交技术 植物细胞工程理论基础: 细胞的全能性(P33) 思考: 1、植物组织培养的原理—— 细胞的全能性 一、植物组织培养技术 (一)植物组织培养的过程及原理 2、材料 胡萝卜根、经过灭菌的培养基等 3、方法步骤 4、讨论 实验 胡萝卜的组织培养 P34 (1)、在组织培养实验中,为什么要强调所用器械的灭菌和试验人员的无菌操作? 防止培养基上被杂菌污染,抑制培养物的生长,甚至导致其死亡。 (2)、在本实验中,切取胡萝卜块强调要切取含有形成层部分,原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。请思考一下,胡萝卜的其它部分(如茎、叶、花),是否也能培养成小植株,你能用实验的方法进行验证吗? 可以,只是诱导愈伤组织比较困难。 花粉细胞也可经过组织培养形成完整植株,但此植株为单倍体。 愈伤组织 胚状体 脱分化 脱分化 再分化 再分化 幼苗 离体的植物器官、组织或细胞(外植体) 成体 (3)根据上面的实验过程,概括出植物 组织培养技术的流程简图。 如:胡萝卜的形成层、菊花幼茎段、月季的花药… 遮光 一定的 光照 在有光时,往往容易形成维管组织,而不易形成愈伤组织 培养条件 芽发育成叶,叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照 问题1、植物细胞在什么情况下可以表现出全能性? 植物细胞表现出全能性的条件: 离体培养 一定的营养条件 一定的植物激素 其他的外界条件 问题: 3、决定植物脱分化、再分化的关键 因素是什么? 植物激素的种类和比例 2、离体的器官、组织或细胞,如果不进行脱分化处理能否培养成完整的植物体? 不能,因为细胞已经分化,失去了分裂能力。不进行脱分化处理就不能形成愈伤组织 问题: (二)植物组织培养的概念P36 : 就是在无菌和人工控制条件下,将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上,给予适宜的培养条件,诱导其产生愈伤组织,丛芽,最终形成完整的植株。 1.下面所列过程是植物组织培养的简略过程。请据此回答: ①→脱分化→②→再分化→③→④ ⑴①表示 ,它能被培养成④的根本原因是 。 ⑵②表示 ,它的细胞特点是 、 外植体 植物细胞全能性 愈伤组织 细胞排列
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