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ELISA实验原理和操作;一、实验目的;二、实验原理;免疫酶技术(enzyme immunoassay)：
是将抗原和抗体的特异性免疫反应与酶的催化反应相结合而建立的一种免疫检测技术。
就是利用酶标记抗体或抗原，以检测相应抗原或抗体的一种免疫学标记技术。;酶联免疫吸附试验ELISA
（enzyme linked immunosorbent assay）
是一类常用的免疫酶技术。是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。
常用的酶：辣根过氧化物酶(HRP)
碱性磷酸酶（AP）。;ELISA检测抗原;ELISA检测抗体;ELISA检测抗体;;竞争ELISA检测 抗原;;;实验材料：
羊抗人血清白蛋白抗体（一抗）
已知含量的人血清白蛋白（作标准曲线）
待检人血清白蛋白
辣根过氧化物酶标记的驴抗羊抗体（二抗）
包被液CBS：PH9.6，0.05mol/L碳酸盐缓冲液
洗板液或稀释液：PH7.4，0.01mol/L PBS
底物溶液：OPD-H2O2
终止液：2mol/L H2S04
酶标反应板（一条/人）;三、操作步骤;抗原与抗体的预孵育
制作标准曲线：
在稀释板中，用PBS倍比稀释标准抗原，每种浓度的抗原最终为50μl，分别在各抗原孔中加入250μl一定浓度的抗体，放入37℃恒温培养箱中30 min。
待测抗原：
取50μl未知浓度的抗原按照同上操作。;3. 与固相抗原的竞争结合
取稀释板中预孵育的抗原抗体混合液100μl，加入酶标板的抗原孔中，放入37℃恒温培养箱中60 min。洗板3次。 ;4. 酶标二抗的结合
酶标抗体用稀释液稀释至工作浓度后，加入每孔中，100ul/孔，置湿盒中放37℃ 30min。洗板3次。
5. 加入底物显色液（用前再配制，并置棕色瓶内）
每孔加入底物显色液，100ul/孔，湿盒中37℃保温一定时间。
6. 终止反应
待出现明显颜色反应（或一定时间）后，加入终止液， 50ul/孔以终止反应。
7. 结果测定
用酶标仪在492nm波长下测定OD值。
以标准抗原的浓度为横坐标，相应的OD值为纵坐标绘制标准曲线，计算未知抗原的浓度。;四、思考题
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