25.病毒感染的查方法与防治原则.pptVIP

病毒感染的检查方法与防治原则南方医科大学公共卫生与热带医学学院 微生物学系张其威 PhDEmail：zhang.qiwei@QQ: 3910035 病原学诊断的意义 有助于临床治疗（抗生素、干扰素等） 为控制病毒学疾病的流行提供实验依据（疫苗等） 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”（2000-10000U）或两性霉素B（2ug/ml)处理 2.低温保存，尽快送检（冰块，CO2） 3.血清学诊断采双份血清（发病初，2-3周） 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 细胞培养（cell culture） 鸡胚接种（egg inoculation） 动物接种（animal inoculation） （一）病毒的分离培养 1.细胞培养（简述） 单层细胞培养（monolayer cell culture） 分类 悬浮细胞培养（suspended cell culture） 原代细胞（primary cell） 细胞种类 二倍体细胞（diploid cell） 传代细胞系（continuous cell line） 病毒的细胞培养 特点：①对多种病毒敏感 ②生长能力有限（20代）, 获取成本高 ③可携带潜伏病毒（EB） 2.鸡胚培养 采用孵化9～14天的鸡胚 绒毛尿囊膜（allantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔（allantoic cavity） 接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔（amniotic cavity） 流感病毒的初次分离 卵黄囊（yolk sac） 嗜神经病毒 3.动物接种 应用：尚无敏感细胞的病毒培养（HCV等） 动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高，动物 体内常带有潜伏病毒，安全性要求高 1．病毒增殖鉴定 (1)细胞病变效应（cytopathic effect, CPE ） ①细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落等（多数病毒）； ②形成多核巨细胞或称融合细胞（麻疹病毒、巨细胞病毒、呼吸道合胞病毒等）； ③在培养细胞中形成包涵体（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。 (4)细胞代谢改变 细胞代谢变慢 pH改变 （adenovirus） 2.病毒形态学鉴定 电子显微镜：设备、操作复杂，应用受限 光学显微镜：可见大病毒（痘类病毒）， 对一般病毒检测意义不大 3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型 (1)血凝抑制试验（hemagglutination inhibition test）—正粘病毒型与亚型鉴定 病毒＋鸡红细胞＝凝集（血凝试验/血凝效价） 病毒＋特异性抗体＋鸡红细胞＝不凝集 （血凝抑制试验） 3.病毒血清学鉴定 (2)免疫标记法（FIA、EIA/ELISA、RIA） ——多种病毒鉴定 (3)凝胶免疫扩散试验(gel immuno- diffusion test) ——多种病毒鉴定 4.病毒分子生物学鉴定 抗原变异 病毒基因的鉴定 核酸扩增 核酸杂交 基因芯片 基因测序 Calculate TCID50. Formula: TCID50/100ul=[(% positive value 50%)?50%]/[(% positive value 50%)?(% positive value 50%)]*log Dilution factor#?+ (log dilution 50%) ?#： 10-fold dilution, it is 1. (四) 新病毒的鉴定 核酸类型的测定(PCR) 理化性状的检测（如对干、热、酸、脂溶剂的敏感性等） 形态学鉴定 （电镜） 血清学鉴定 （中和试验） 基因测序和生物对比 （序列同源性分析） 三、病毒感染的血清学诊断 应用于： ①采取标本分离病毒为时已晚 ②