蛋白质及氨基酸分析.pptVIP

第二节 蛋白质的定性测定 一、蛋白质的一般显色反应 电泳或纸层析之后用一些染料与蛋白质结合并变色。书中列举了常用染料。 二、复合蛋白质的显色反应 （一）糖蛋白的显色（3种方法） （二）脂蛋白的显色（2种方法） 1.原理 样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分 解，其中碳和氢被氧化成二氧化碳和水逸出，而部分硫 酸被还原成二氧化硫，样品中的有机氮转化为氨与过量 的硫酸结合成硫酸铵; 然后加碱蒸馏，使氨蒸出，用弱 酸硼酸吸收后再以标准强酸如盐酸或硫酸溶液滴定，根 据标准酸消耗量可计算出蛋白质的含量。 2.操作步骤 准确称取样品0.50-2.00g→500ml凯氏瓶中→加10g 无水K2SO4→加0.5gCuSO4→加20mLH2SO4→通风橱中先以 小火加热，待泡沫消失后，加大火力，消化至透明无黑 粒后（不时转动消化瓶使粘附于瓶壁上的样品溶于消化 液中）→继续消化30分钟→至到样液呈绿色，停止消 化，冷却。 将消化好并冷却至室温的消化溶液全部转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。 向接收瓶内加入10mL4%硼酸溶液和1～2滴混合指示 剂。将接收瓶置于蒸馏装置的冷凝管下口，使下口浸入 硼酸溶液中。取10±0.05mL稀释定容后的试液，沿小玻 璃杯移入反应室，并用少量蒸馏水冲洗小玻璃杯，一并 移入反应室。塞紧棒状玻璃塞，向小玻璃