第三章 DNA的复制.pptVIP

③CAAT框 一般位于-75附近，一致序列为GGC（T）CAATCT。该序列的碱基的缺失导致转录效率的降低。表明CAAT框的功能控制转录起始的频率。 ④增强子 能够增强与之相连锁的基因的转录活性的调控序列。这种增强作用是通过结合特定的转录因子或影响DNA的构象实现的。 又称为远上游序列，一般位于-100以上。SV40增强子序列具有两个正向重复的72bp序列（-107- -178；-179 - -250） 4、转录起始 （1）σ亚基与核心酶形成全酶，沿DNA链移动采取快速的尝试—错误的方式寻找启动子。 （2）起始识别 当σ亚基发现启动子上的识别位点后，全酶就与-35序列结合（初始结合），形成一个封闭的启动子复合物。 （3）紧密结合 RNA聚合酶分子很大，与-35序列结合的同时，一端可以到达-10序列，并且整个酶分子向-10序列转移，二者牢固结合（操纵基因上必须没有阻遏蛋白）。 （4）开放性的启动子二元复合物的形成 -10序列及起始位点处发生局部解链，一般为12-17bp。形成由全酶和局部解链的启动子组成的开放性的启动子二元复合物。 （5）第一个磷酸二酯键形成 在开放性的启动子复合物中，RNA聚合酶上的起始位点和延长位点被相应的核苷酸前体占据，嘌呤核苷三磷酸（rNTP）在β亚基的催化下形成RNA的第一个磷酸二酯键。形成由RNA聚合酶、DNA模板和新生的RNA链组成的三元复合物。 （6）σ因子脱落 三元复合物形成后，σ因子就释放出去。从而核心酶就容易在链上移动合成RNA链，同时由于存在一个三角结合关系（核心酶-DNA-RNA），使RNA聚合酶不会从模板上脱落下来。 二、翻译 1、副密码子（paracoden） 定义：tRNA分子上决定其携带的AA种类的区域。如丙氨酸G3:U70；Ser(G1-C72; G2-C71; A3-U70; C11-G24)：前三个在受体臂上，后一个在D环上。 特点： 没有固定位置，相对较集中在受体臂和反密码子上； 可能有一个或几个碱基对构成； 同功tRNA有共同的副密码子，如携带丙氨酸的tRNA有3种，它们都具有G3:U70； 作业： 1、副密码子（paracoden）定义 2、简述原核生物RNA聚合酶的结构及各亚基的功能。 3、简述真核生物RNA聚合酶的种类和功能。 4、简述原核生物启动子的结构及各部分的作用。 5、试述真核生物RNA聚合酶II的启动子结构及各部分的作用。 6、试述原核生物转录的起始过程。 * * （2）引物的合成方式是阵发式的 每次只能合成6-15个核苷酸；当DNA聚合酶α少时，引物是多次阵发性合成的多聚核苷酸；当DNA聚合酶α活性很高又有充足的dNTP时，复制的引物就是第一次阵发性合成的产物。 （3）DNA引发酶既能利用rNTP，也能利用dNTP作为合成引物的前体 在每次阵发性合成的引物中，第一个核苷酸总是rA；而以后的核苷酸要么都是清一色的核糖核苷酸，要么都是脱氧核糖核苷酸。 三、SV40（猴肾病毒）的大T抗原与复制原点 1、SV40是研究真核生物DNA复制的主要模型 ①染色体具有核小体结构 双链环形DNA分子，5243bp，是具有核小体结构的微染色体。 ②SV40的整个复制机构（除大T抗原）都来自寄主蛋白质 ③基因组小、核小体结构、使用宿主的复制体系决定了它是真核生物DNA分子复制的模型 2、大T抗原 由SV40 DNA编码的蛋白质，四聚体，在SV40 DNA复制原点上有三个结合位点，同时还具有ATPase活性和螺旋酶活性。它还与某些特异的蛋白质发生相互作用。 3、SV40 DNA复制原点 位于5192-5243（0）-30共82bp的序列。其中包括大T抗原的结合位点Ⅰ和Ⅱ、连续的16bp的AT序列、RNA-DNA转变位点。 4、SV40 DNA复制的过程 ①大T抗原结合于复制原点的TagII（含27bp的回文序列）； ②大T抗原发挥螺旋酶活性促进富含AT区域的解链； ③单链DNA结合蛋白RF-A结合到解开的单链上，使之稳定，解链区与以动态方式向两侧传播； ④单链DNA序列上的引发部位暴露出来； ⑤DNA引发酶-Polα复合体结合上去，合成引物； ⑥在RF-C（具有ATP酶）作用下，Polα以引物为依托，合成右向复制叉的第一个冈崎片断； ⑦到了左向复制叉前导链和右向复制叉后随链的分界区，Polα与引发酶复合体从单链解离，再结合到右向复制叉其他引发部位，合成后随链； ⑧Polδ和PCNA（proliferating cell nuclear antigen）结合到第一个冈崎片断3’端开始合成前导链； ⑨前导链在Pol