免疫组化结果判断及常见问题的分析学习课件演示课件.pptVIP

编号 阳性片 待检片 阴性对照 结论 1 2 3 4 5 － ＋ － ＋ ＋ － ＋ ＋ － ＋ － ＋ － － － 操作失误，抗体失效 非特异性着色 阳性片不含靶抗原 待检片不含定位抗原 待检片含定位抗原 二、染色结果的判断 * 0901 PCNA S-P×400 S-P×400 1-day CM 4-day CM 阳性强度 　20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。 三、结果分析 * 0901 P53 阳性细胞百分比 计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例： ＜5% （－） 5%~30% （＋） 30%~50% （ ＋ ＋ ） ＞50% （ ＋ ＋ ＋ ） * 0901 PCNA Barnes法 A：瘤细胞显色有无及深浅 0（不着色） 1（浅黄色） 2（棕黄色） 3（棕褐色） B：显色细胞的比例 1（1%~10%） 2（11%~50%） 3（51%~80%） 4（＞80%） 评分=A×B 0分：阴性 1~4分：弱阳性 ＞4分：强阳性 * 0901 胶原染色 阳性面积百分比 40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。 * 0901 CD34 Weidner法（MVD计数） 孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。 低倍镜下找到组织内密度最高区域。 40×10视野下计数微血管数目。 * 0901 K-ras VEGF * 0901 附：定量分析——图象处理系统 1、图象处理： 利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。 1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。 2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。 * 0901 2、图象处理系统组成 图象输入（显微镜、扫描仪） 图象处理运算（病理图文分析软件） 图象、数据输出 * 0901 3、图象处理系统功能 几何形态学定量分析 细胞核、浆的大小、面积、核浆比； 细胞分布密度、个数； 血管、腺体的面积、密度；间质的面积 免疫组织化学分析 按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量 DNA倍体分析 计算正常细胞及肿瘤细胞DNA 含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图 AgNOR分析 颗粒分析：数目、大小、面积、比例 * 0901 * 0901 四、免疫组化异常着色及对策 1.非特异性着色及其对策 非特异性着色原因 对策 操作过程冲洗不充分 每步冲洗3×5min 内源性过氧化物酶 3％H2O2封闭 内源性生物素 使用生物素阻断试剂盒阻断 电荷吸附 非免疫动物血清封闭 抗体不纯 采用单克隆抗体 切片制片不当 改善取材和制片 加试剂后切片干燥 防止切片干燥 * 0901 内源性生物素—肾小管 * 0901 内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌 * 0901 蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色 * 0901 嗜酸性粒细胞中细胞色素显色 * 0901 吞噬细胞内 含铁血黄素 * 0901 坏死组织着色：AE1/AE3 * 0901 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 . 极品 免疫组化结果判断及常见问题分析 武汉大学病理学教研室 杨飞 * 0901 * 0901 肝脏：CK8理想着色，胆管上皮细胞强阳性， 肝细胞呈不同层次阳性。 * 0901 pan CK（AE1/AE3） 在肝脏理想的染色，采用了热修复。 肝细胞膜、胆管强而清晰的着色。背景干净。 * 0901 一、特异性染色的判断 1.特定的定位 细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型 或胞核型 间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性 2.染色的不均一性 阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布 染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少 3.排除人为造成的非特异性染色 切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。