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第四章 药物定量分析与分析方法验证 苏州大学药学院药物分析教研室 第一节 定量分析样品的前处理方法 一、概 述 前处理（预处理）的目的 　1）提高分析方法的选择性：　主要以分离提取为基础的预处理方法。分离有离线（沉淀、萃取等等）和在线（色谱、预柱等等）两类。 　2）提高分析方法的灵敏度：　主要以待测组分的富集为基础的预处理方法。如固体萃取、色谱柱切换技术。 药物分析的预处理 　1）原料药：由于高纯度，多数不需要预处理。 　2）制剂：一般需要预处理。（参见Chapter 12) 3）含特殊元素的药物：如金属、卤素、硫、磷、氮等，需要预处理。 含特殊元素的药物预处理的目的 　　　含金属、卤素、硫、磷、氮等特殊元素的药物，其药物定量分析通常利用其无机状态进行测定，而含卤素药物（特别是芳香性卤素药物）往往会出现多种卤素异构体的混和药物，其卤素反应的差异性难于同时准确确定。因此，它们在分析前需要经过不同方法进行预处理。 前处理方法： 　　　基于特殊元素在分子中结合的牢固程度而选用不同的方法，通常分为两种，即 　1）不经有机破坏的分析方法 　2）经有机破坏的分析方法 二、不经有机破坏的分析方法 （一）直接测定法 适用性：此法应用于在水溶液中可以电离、不需有机破坏即可直接测定的药物： 1）凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物（如有机酸和酚的金属盐） 2）金属原子直接与碳原子相连，但键结合不牢固的有机金属药物。 （二）经水解后测定 1.碱水解后测定法 适用性：本法适于卤素结合不牢固的有机药物。 例：卤素与脂肪碳链相结合。 方法：将含卤素的有机药物溶于适当溶剂中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液加热回流使其水解，将有机结合的卤素转变为无机卤素离子，再选用间接银量法测定。 例：三氯叔丁醇的含量测定 2、酸水解后测定法 　　本法将含有金属的有机药物经酸水解，将有机金属转变为可溶性的无机金属盐，再进行配位滴定或剩余酸碱滴定，从而间接确定药物含量。 如：硬脂酸镁的测定 （三）经氧化还原后测定法 1、碱性还原后测定 适用性： 卤素碘结合于芳环上的药物。 方法：由于碘的结合较牢固，须在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使碳碘键断裂，形成无机碘化物后测定。 如：泛影酸测定 2、酸性还原后测定法 例：碘番酸的含量测定：在醋酸酸性条件下用锌粉还原，使碳一碘键断裂，形成无机碘化物后用银量法测定。 3、利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量 （1）含锑药物 利用五价锑有机药物中可游离Sb5＋的氧化性，在酸性溶液中氧化碘化钾，并定量析出碘，可用硫代硫酸钠滴定液滴定。 （2）含铁药物 含铁药物加酸溶解后，游离出Fe3+，利用其在酸性溶液中氧化碘化钾，析出的碘可用硫代硫酸钠滴定液滴定。 三、经有机破坏的分析方法 适用性：在含金属、卤素、氮、磷、硫的有机药物结构中，这些特殊元素与碳原子结合牢固者，需采用有机破坏，使元素的有机结合转变为无机结合后进行含量测定。 方法：湿法破坏、干法破坏（其中包括高温炽灼法、氧瓶燃烧法）。 （一）湿法破坏 适用性：主要用于含氮有机药物，包括生物制品中含氮元素以及蛋白质分析。 方法：　主要以硫酸作为分解剂（消解剂、消化剂），以氧化剂（如硝酸、高氯酸、过氧化氢等）作为辅助分解剂，从而实现氮元素从有机结合向无机结合的转化。 凯式定氮法：　Ch.P收载的“氮测定法”，收载了“第一法（常量法）”和“第二法（半微量法）”。 1）基本原理 消　化：　在硫酸铜催化下，以硫酸作为氧化剂，同时以无水硫酸钠（或硫酸钾）提高硫酸沸点，以提高消化温度，使药物完全有机破坏，转变为二氧化碳、水、氨，氨被过量的硫酸吸收，成为硫酸铵盐。 碱化与水蒸气蒸馏：　将消化后的硫酸铵盐，经氢氧化钠溶液碱化，释放出氨气，并随水蒸气蒸馏而逸出消化体系，并被硼酸溶液吸收。 滴　定：　将氨的硼酸吸收液用硫酸滴定液滴定。 2、方法 第一步：　消化在长颈的、硅玻璃或硼玻璃制的凯氏烧瓶中完成，并在瓶口放置一个小漏斗。 注意：1）称量纸一同放入消化；2）烧瓶45°斜置；3）开始炭化缓缓加热，过后强热至沸腾，并间息性旋转烧瓶；4）应在通风橱内进行。 第二步：　碱化与水蒸气蒸馏：“常量法”在消化瓶中进行，而“半微量法”将消化液转移至蒸馏装置中进行（See Fig.4-1 in P82) 。 注意：1）消化液放冷后，缓缓沿瓶壁加水稀释，振摇，以防止浓硫酸稀释剧烈放热而爆沸；2）稀释液放冷后，沿瓶壁缓缓加入氢氧化钠溶液碱化，此时不能振摇，使消化液与碱液分层，防止碱化。 第三步：　将蒸馏后的吸收液进行滴定。 注意：本法须空白试验校正，即从第1－3步的所有过程同时操作，仅仅是不取供试品，但需要加入同样