第6章 蛋白质理化性质及分离纯化.pptVIP

茶学与生物系 张 剑 核糖核酸酶变性与复性作用 ★纯化的实质：增加制品的纯度或比活性。 ★一般程序： （1）前处理（即提取）、 （2）粗分级分离 （3）细分级分离 （4）浓缩与保存。 ★ 分离纯化蛋白质的主要方法： 1.定义：利用蛋白质分子对其配体分子（或配基）特有的识别能力，也即生物学亲合力，建立起来的一种有效的纯化方法。 2.配基：酶的底物、辅酶、抑制剂、效应物及其结构类似物，激素与受体蛋白，抗原与抗体，凝集素。配基先结合到琼脂糖等介质上作为固定相。 3.原理：先用不含配基的洗脱剂进行洗脱，将被分离蛋白质以外的杂志洗出来；然后用含配基的洗脱剂进行洗脱，将被分离的蛋白质洗出来。 4.常用方法： 免疫亲和层析、金属螯和层析、染料配体层析 1.定义：蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳(elctrophoresis) 。 2.几种重要的蛋白质电泳： SDS-聚丙烯酰胺凝胶