病原学检查资料.doc

病原学检查 B.1 血涂片的制作 用一次性采血针在耳垂或指端采血，婴儿可从拇趾或足跟采血。取血在表面洁净、无刮痕的载玻片上涂制薄血膜和(或)厚血膜。用推片的左下角刮取血液4μl～5μl，再用该端中部刮取血液1.0μl～1.5μl。将左下角的血滴涂于载玻片的中央偏左，由里向外划圈涂成直径0.8cm～1cm的圆形厚血膜。厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到5个～10个白细胞为宜。用干棉球抹净角上的血渍，然后将推片下缘平抵载玻片的中线，当血液在载玻片与推片之间向两侧扩展至约2cm宽时，使两张玻片保持250～350角，从右向左迅速向前推成舌状薄血膜。 B.2 染色 B.2.1 吉氏染色 先用甲醇固定薄血膜。成批染色时，将血膜朝一个方向插入染色缸中，或每对载玻片血膜朝外插入染色缸中，倒入新配制的2%吉氏原液（2mL吉氏原液与98mL蒸馏水或PBS缓冲液混匀)渗没厚、薄血膜，30min后，向染色缸中注入自来水或PBS缓冲液至溢出，除掉染液表面浮渣，将染色缸中残余的染色液倾出，加入新水，反复冲洗2～3次，然后取出玻片，将血膜朝下插在晾片板上晾干。单张血膜染色可取蒸馏水或PBS缓冲液2mL加入吉氏染色1～2滴，混匀后滴在厚、薄血膜上，20min～30min后，水洗、晾干。 B.2.2 瑞氏染色 用蜡笔在厚、薄血膜间划一界限，滴几滴蒸馏水在厚血膜上溶血。溶血后倾去水滴。在薄血膜上加瑞氏染液5～8滴，染色1min～2min。然后再加5～8滴蒸馏水于薄血膜上，用吸管将染液与蒸馏水混合均匀后，把染液引到厚血膜上，使厚血膜再染色10min。用清水轻轻冲去染液，晾干。 B.3 血涂片检查 在染色后的血膜上加一滴香柏油，用光学显微镜油镜检查。以检查厚血膜为主，薄血膜主要用于虫种鉴别。着色较好的血膜，红细胞呈淡红色，嗜酸粒细胞颗粒呈鲜红色，嗜中性粒细胞核呈紫蓝色，淋巴细胞及疟原虫胞浆呈蓝色或淡蓝色，疟原虫核呈红色。除环状体外，其他各期均可查见疟色素。疟原虫形态见表B.1和表B.2。以查完整个厚血膜，未查见疟原虫者判为阴性。根据疟原虫形态确定恶性疟、间日疟、三日疟、卵形疟或混合感染。 表B.1 四种疟原虫薄血膜形态鉴别(吉氏染色) 时期 形态 间日疟原虫 恶性疟原虫 三日疟原虫 卵形疟原虫 被寄生 红细胞 大小 形状 颜色 斑点 胀大 ? 褪色 薛氏点出现稍晚，红色，细小数多 正常 ? 正常或稍紫 茂氏点红色，粗大数少 正常或缩小 ? 正常 齐氏点淡红色，微细 正常或稍胀大 卵圆形或边缘呈伞矢状 褪色 薛氏点出现较早粗大，数多 小滋 养体 (环状 体) 大小 ? ? 核 胞浆 ? 色素 较大，约占红细胞 直径的1/3 ? 1个 较薄 ? 无 小环状体较小，约占 红细胞直径1/6, 大环状体与间日疟原虫相似1或2个 小环状体纤细，大环状体与间日疟原虫相似 无 中等 ? ? 1个 较粗厚 ? 偶见细小褐色颗粒 中等 ? ? 1个 较粗厚 ? 无 大滋 养体 大小 核 胞浆 色素 色素 较大 多见1个 阿米巴样，常含空泡 黄褐色，细小，杆状，散在分布 较小 1或2个 圆形，空泡不显著 黄褐色，细小，结成 团块后，呈黑褐色 较小 1个 带状，空泡不显著 深褐色，粗大，沿边缘分布 较小 1个 圆形，空泡不显著 棕黄色，较粗大 未成熟 裂殖体 大小 核 胞浆 ? 色素 较大 2个以上 圆形或不规则，空泡消失 黄褐色，分布不匀 较小 2个以上 圆形，空泡消失 ? 黑褐色团块状 较小 2个以上 圆形，空泡消失 ? 深褐色，分布不匀 较小 2个以上 圆形或卵圆形，空泡消失 棕黄色，分布不匀 成熟 裂殖体 大小 裂殖子 ? 色素 大于正常红细胞 12～24个，常为16～18个，排列不规则。裂殖子较大 黄褐色，常聚集一侧 小于正常红细胞 8～26个，常为8～18个，排列不规则。裂殖子较小， 黑褐色团块 小于正常红细胞 6～12个，常为8个，常排列如菊花状。裂殖子较大 深褐色，常聚集中央 小于正常红细胞 6～14个，常为8个，排列不规则。裂殖子较大 棕黄色，聚集中央或一侧 雌配 子体 大小 形状 核 ? 胞浆 色素 大于正常红细胞 圆形 1个，较小，深红色，位于一侧 深蓝色 黄褐色，均匀散在 较大 新月形，两端尖锐 1个，较小，深红色， 位于中央 深蓝色 黑褐色，紧密分布于 核周围 小于正常红细胞 园形 1个，较小，深红色， 位于一侧 深蓝色 深褐色，均匀散在 小于正常红细胞 圆形 1个，较小，深红色， 位于一侧 深蓝色 棕黄色，散在 雄配 子体 大小 形状 核 ? 胞浆 色素 大于正常红细胞 园形 1个，较大，淡红色，位于中央 浅蓝色 黄褐色，均匀散在 较大 腊肠形，两端钝园 1个，较大，淡红色， 位于中央 浅蓝色或淡红色 黑褐色，松散