PCT胶体金试纸制备和其原理课件.pptVIP

11、配置划膜工作液 1、3%海藻糖溶液的配制：用已配好的PBS溶液做溶剂，配制3%海藻糖溶液（现配现用）。 例：5mlPBS做溶剂，加入0.1499g海藻糖配置成3%海藻糖溶液，用玻璃棒搅拌 2、划膜工作液的配制：a:检测线-T线（鼠抗人单抗配制 1ml 0.7mg/ml） 例： b:质控线-C线（羊抗鼠多抗配制 1ml 0.9mg/ml） 例： 12、划膜 1、清洗划膜泵，清空清洗液，循环或者倒吸划膜液，使不要有气泡； 2、按照《划膜机标准操作规程》，以“252”泵速（对应速度1ul/cm），将质控线液和检测线液均匀地划在膜上，检测线划在距膜顶端15mm±0.1mm处，质控线划在距膜顶端9mm±0.1mm处，质控线与检测线相距6mm±0.1mm。（NC膜靠近吸水纸一端为顶端） 3、划膜后37度干燥17-20h，干燥后铝箔袋封存。 注意点：划膜时注意两划膜线的距离是不是6mm，划膜是否有不均匀或者段线的地方。划膜量控制为1ul/cm。装袋要在干燥箱中进行。 13、切割和组装 1、各组分用切割机切割成以下大小： 金标垫：6mm ×300mm 样品垫：19mm×300mm 吸水垫：17mm×300mm 2、组装大卡：金标垫1片，搭上NC膜3-4mm ； 样品垫1片，搭上金标垫2mm； 吸水纸1片，搭上NC膜2mm。 14、切条 1、组装环境条件的控制在相对湿度30%以下，并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时。 2、按照《切条工序作业指导书》使用切条机，将组装好的降钙素原（PCT）检测试剂条切割成宽度为3.42mm±0.1mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次。 切好的试条 17mm 19mm 6mm 10mm 6mm 9mm PCT胶体金试纸制备和其原理 胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（gold solution）： 是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层双层正离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。 二、胶体金的特性 1、胶体性质 金颗粒直径多在1～100nm，稳定、均匀、呈单一分散的状态悬浮在溶液中；胶体金对电解质的敏感性，易使胶体金的稳定状态被破坏，使单一分散的胶体金颗粒聚集成大颗粒，从溶液中沉淀下来。某些蛋白质等大分子物质具有保护胶体金、增强胶体金稳定性的作用。 2、呈色性 微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。最小的胶体金（2～5nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（10～20nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（30～80nm）则是紫红色的 3、光吸收性 胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰，这个光吸收峰的波长（λmax）在510～550nm范围内，随胶体金颗粒大小而变化，大颗粒胶体金的λmax偏向长波长，反之，小颗粒胶体金的λmax则偏于短波长。 胶体金的这一特性被用来检测所配制的胶体金溶液是否符合生产所需。实验生产需要的合格的胶体金溶液的最大吸收波长应在522~528nm处，且检测最大吸光度处吸光值与456nm处吸光度值的比值，应在1.6-1.8之间。 胶体金粒径（nm） 1%柠檬酸三钠加入量（ml） 胶体金特性 呈色 λmax 16 2.00 橙色 518 24.5 1.50 橙红 522 41 1.00 红色 525 71.5 0.70 紫色 535 三、免疫胶体金技术介绍 1、免疫胶体金技术简介 免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique)是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，英文缩写为：GICT。 胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。 胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。 根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物