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维普资讯 第 l5卷第3期 中 国 病 毒 学 l5 N0．3 2000年 9月 V [ROLOGICA SINICA $ep 2000 t1 (． 2l， r 应用RT-PCR橙测流产胎儿组织中 ．、 呷 ．／ 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ／ 蔡家利 ，姜平 ，蔡宝祥 ． ． — — — — 一 — — — — — — — — ～ (西南农业大学动物养殖学 院．重庆 400716) (南京农业大学动物医学院．南京 210095) 抽蔓 ：根据 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型膜蛋 白和核衣壳蛋 白基 因序列 ．设计 丁一对 含有 EcoR 【和 ＆ H I酶切位点的 引物 ．用 RT-PCR对 四十流产猪场 的病料进 行丁检铡 ．扩增 出 约 918b口的基因片段。通过病毒分离 、酶切鉴 定和序列分析证实为 PRRSV感染。结果说 明应用 所设计 的引物进行 RT-PCR快速检测 PRRS是可行的，为我 国快速特异诊断 PRRS和 PRRSV强 毒株的槔 人研究奠定丁基础 美奠调：蓬繁殖与呼吸综鱼_征：反转录一多檗酶链反应(匿 坐 ；鲎 中囝分类号 ：$858．28 文献标识码 ：A 文章编号 ：1003—5125(2000)03—0272—05 猪繁殖与呼吸综合征(PRRs)是一种新发现的动物传染病，以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难 为特征。我国 1996年报道本病开始流行[I_2】。病原 PRRSV分类地位 已基本确定。PRRSV、马 动脉炎病毒、小鼠乳酸脱氢酶升高病毒、猴出血热病毒一起归为动骈：炎病毒科 ( 帕诎 ) 。 由于 PRRSW-基因结构变异较大，所 以根据 基因结构和 抗原 的不同分为 欧洲 型和美 洲型。 PRRSV为正链 的单股 RNA病毒，基因组长 15kb．是动骈：炎病毒科 中最大 的一类病毒。PRRSV 基因组含有 8个开放阅读框(ORF)，分别编码相关的蛋 白质。ORF2一ORF7编码病毒的结构蛋 白 质 ，其 中 ORF6和 ORF7分 别编码 病毒 的膜 蛋 白(M)和核衣壳蛋 白(N)。ORF6和 ORF7是 PRRSV整个基因组 中较保守 的序列…。各种分子生物学诊断方法都缘于这段基因。RT-PCR是 日前较特异的诊断方法。我国目前报道的主要是一些常规血清学诊断方法 J。根据我国PRRS 的流行特点．我们设计 了一对能够扩增 M 和 N基因的引物，通过 RT-PCR来检测 PRRS可疑猪 场 的病料 ，以探讨这种方法的可行性，为快速诊断 PRRS莫定基础 。 1 材料与方法 1．1 囊●样品制鲁 取可疑 PRRS猪场 流产胎 儿肺 、脾和淋 巴结剪碎．匀浆．制成乳 悬液，冻融三欢。10000r／rain离 心 10 Tllin．取上清 作病毒分离培养鉴定。荤I余 上清加等体积氰仿抽提 3次．每次 10000r／min离心 10rain．取上清。 1．2 RNA制鲁 参考林 万明介绍方法 【。取病毒样品上清 500 ，．加人 16％PEG(6000)500．uL．混匀。12000r／rain离心 10rain，弃上清 ．沉淀蒋于 1mLTE(pH8．O)中．加蛋 白酶 K 1mg和 10％SDS100 Lt37℃作用 2h。用饱和 收蒋 日期 ；1999