核酸的分离纯化及鉴定技术生化.pptVIP

提取核酸的目的:;主要核酸类药物及用途 ;主要核酸类药物及用途; DNA ：主要存在于细胞核的染色体中。核外也有少量DNA，如线粒体DNA（mtDNA），叶绿体DNA（cpDNA），质粒DNA。 RNA：主要存在于细胞质中，如mRNA，rRNA，tRNA，miRNA等。 除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。;一、 材料与方法的选择 ; 根据具体生物材料的性质与起始量、待分离核酸的性质与用途而采取不同的方案。 无论采取何种方法，都应遵循总的原则： 保证核酸一级结构的完整性， 尽量排除其它分子的污染，保证核酸样品的纯度。 ;核酸制备时应注意的事项: ①尽量简化操作步骤，缩短提取过程。 ②减少化学因素对核酸的降解(pH4-10) ③减少物理因素对核酸的降解,如机械剪 切力和高温 ④防止核酸的生物降解。 ;核酸制备的步骤： ; 破碎细胞 微生物：溶菌酶、SDS裂解。 高等植物：捣碎器破碎、液氮研磨。 动物：液氮处理后用匀浆器破碎。 细胞器DNA，首先纯化细胞器。 以上处理时均要同时加入核酸酶抑制剂 ;DNA酶抑制剂： 金属离子螯合剂：DNA酶需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的激活