细菌药敏试验课件.pptVIP

细菌药敏试验;抗菌药物敏感试验;药敏试验的意义;药敏试验;药敏试验折点的建立 ;MIC的分布;药代动力学和药效学;MIC与抑菌圈直径的线性关系;抑菌圈直径与MIC的关系;不同国家的判定折点 －可能不同;CLSI的简单介绍;CLSI临床微生物检验标准及操作规范;判断折点;敏感性分类(CLSI的定义);敏感性分类（2）;药敏试验的方法学; 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。 ;操作方法 ： 1.将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm的平板，其厚度4mm。 2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。;3.置于无菌生理盐水中，校正其浊度于McFarland No 0.5管。;4.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 ;5.平板置室温干燥3~5分钟，用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。;6.盖上平板的盖子，置35℃培养箱内孵育16~18小时后阅读结果，对苯唑西林和万古霉素敏感等应孵育24小时。;7.用游标卡尺或直尺量取抑菌环直径，根据CLSI标准，报告细菌对该抗生素 敏感(susceptible,S)、 耐药(resistant,R)、 中介(intermediate,I)。 ;*;*;*;*;*;*;*;*;以一定浓度的抗菌药物与含有被试菌株的培养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀释），经培养后观察其最低抑菌浓度。 稀释法中用琼脂培养基者为琼脂稀释法，用肉汤培养基者为肉汤稀释法。 ;常用抗菌药物容积稀释法;原理： 聚乙烯板内含有各种稀释度的抗菌药物，实验时 加入100μl浓度为105 CFU/ml的菌液，盖上盖板，35℃ 16～20h观察结果。孔底部清晰不出现细菌沉淀的最低 抗菌药物浓度即为该抗菌药物对细菌的最小抑菌浓度， 通过CLSI标准??断其敏感和耐药。再取0.01ml容量接种 环取肉眼观察无菌生长的液体接种于血琼脂平板作次代 培养，经35℃过夜培养后观察最低抗菌药物浓度能杀死 99.9％原始种入的细菌即为该菌的最低杀菌浓度(MBC)。 ;操作方法：1.抗菌药物的稀释和融解;2.在微量聚乙烯微板孔中加入各种不同浓度的抗生素 100μl，从低浓度往高浓度加样，不需要更换吸管。 ;3.挑选18~24小时的菌落置M-H肉汤增菌4~6小时。 4.制备0.5麦氏比浊管，然后1:200稀释，使之最终 浓度105 CFU/ml。;5.用微量加样器接种100μl 到96孔中，盖上盖板。 同时作阳性、阴性对照。 ;阅读结果的正确光源;*;*;*;*;E test 法;操作方法：1~4步骤与纸片扩散法相同。 5.用镊子将E-TEST试条的抗菌药物的一面贴向琼脂表面，有刻度的一面向外，直径140mm的平板可放置6条，9mm平板只能放置1～2试条 。 6.孵育，置平板于35℃孵育16～24h。 ;7.孵育后形成一椭圆形抑菌圈，抑菌圈和试条的相交 处的刻度即为抗菌药物对该菌的最低抑菌浓度(MIC) 。;*;*;*;联合药物敏感试验;联合药物敏感试验;联合药物敏感试验;厌氧菌体外药物敏感试验;厌氧菌体外药物敏感试验;厌氧菌体外药物敏感试验