arms技术介绍解析.ppt

ARMS技术的介绍（the amplification refractory mutation system）;一、ARMS技术的原理二、ARMS技术的特点三、MGB探针及原理四、MGB探针的特点五、ARMS技术的应用六、ARMS实例：β-地中海贫血位点;一、ARMS技术的原理;ARMS技术针对引物3’端进行等位基因特异性的区分。 两种引物形式：“normal”野生型引物，扩增时会被突变的模板阻滞；“mutant”突变型引物，扩增时会被野生型模板阻滞。; 一般情况下，通过引物3’端单个碱基的突变来区分等位基因效果并不理想。所以ARMS技术在??多数情况下还会人为的增加引物3’端附近的碱基的突变以达到区分等位基因的效果。;以kappa casein基因的一个突变位点为例;二、ARMS技术的特点;2.2 ARMS技术具有高灵敏性 检测限可以达到100copies/mL，对于肿瘤组织检测限可以达到0.5%的突变率。;以BRAF V600E为例;2.3 检测时耗短，成本低，结果直观好判读 ARMS结合QPCR或者电泳技术，均只需进行一次PCR反应，时耗短。 ARMS技术需要优化的仅仅是上游引物，这相对于使用MGB探针的荧光定量PCR技术来说，成本低而且结果直观好判读。;三、Taqman MGB探针及其原理;Taqman-MGB RT-PCR原理;4.1 MGB探针的高Tm值;4.2 MGB探针的特异性和灵敏性;同时，MGB探针包括一个不发荧光的猝灭基团（NFQ），它能真正消除传统猝灭基团产生的背景荧光，提高信噪比，从而提供检测灵敏性。检测下限可达到50copies。;4.3 MGB探针结果判读;定性实验：一对引物，一对探针。一般用于等位基因突变位点的分型。主要使用等位点分型点阵来分析。;ARMS和MGB探针的比较;五、ARMS技术的应用;目前国内用ARMS技术拿证的试剂盒有三个：1、产品名称：人KRAS基因突变检测试剂盒(Taqman-ARMS法) 注册号：国食药监械(准)字2013第3400363号生产单位：苏州工业园区为真生物医药科技有限公司2、产品名称：人EGFR基因突变检测试剂盒(Taqman-ARMS法) 注册号：国食药监械(准)字2013第3400362号生产单位：苏州工业园区为真生物医药科技有限公司3、产品名称：四项耳聋基因检测试剂盒(ARMS-PCR法) 注册号：国食药监械(准)字2012第3400599号生产单位：中生北控生物科技股份有限公司;谢谢！