多角体包裹型猪α干扰素在昆虫细胞中的表达-江苏农业科学.PDFVIP

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第２３期 — ４１— 郭建军，曾　静，袁　林，等．多角体包裹型猪 干扰素在昆虫细胞中的表达［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（２３）：４１－４４． α ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．２３．０１２ 多角体包裹型猪 干扰素在昆虫细胞中的表达 α 郭建军，曾　静，袁　林，邱小忠 （江西省科学院微生物研究所，江西南昌３３００９６） 　　摘要：为了获得多角体包裹的重组猪 干扰素，应用Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ昆虫细胞杆状病毒表达系统，将多角体蛋白基 α 因和编码成熟猪 干扰素的基因分别构建到ｐＦａｓｔＢａｃＤｕａｌ载体的ＰＨ、Ｐ１０启动子下，以多角体蛋白Ｈ１ －螺旋序列 α α ＴＭ 为信号肽。将构建质粒转化ＤＨ１０Ｂａｃ 感受态细胞进行同源重组，经抗性和蓝白斑筛选，获得重组穿梭质粒Ｂａｃｍｉｄ， 转染Ｓｆ９昆虫细胞获得重组病毒。通过间接免疫荧光、Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ证明，多角体蛋白与猪 干扰素实现共表达，在 α 信号肽引导下猪 干扰素被包埋进多角体；用微量细胞病变抑制法检测显示，多角体包裹的猪 干扰素有抗病毒活 α α 性，效价达到５亿Ｕ／ｍｇ以上。应用在昆虫细胞中表达的多角体包裹型猪 干扰素，在临床上为猪病毒性疾病的防治 α 与治疗奠定了基础。 　　关键词：猪干扰素；多角体；杆状病毒表达；抗病毒活性 　　中图分类号：Ｑ７８６　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）２３－００４１－０４ ［１－２］ 　　干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，简称 ＩＦＮ）是人和动物细胞受到特定 干扰素蛋白 。猪 干扰素主要由单核细胞产生，有多个 α 干扰素诱生剂刺激后，产生的一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤和 亚型，各亚型结构相似，其活体形式为单体。大量试验表明， 免疫调节等多种功能的细胞因子［１－２］，是现今最理想的一种 猪 干扰素对猪繁殖与呼吸综合征病毒［６－７］、口蹄疫病毒［８］ α ［３］ ［９］ 抗病毒生物制剂 。猪 干扰素（ｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，简称 α 和猪传染性胃肠炎病毒 等具有抑制作用。 ＰｏＩＦＮ ）属于干扰素 型，机体的多种体细胞受病毒感染时 α Ⅰ 多角体是由同源结合的多角体蛋白分子三聚体相互作用 ［４－５］ 均可产生猪 干扰素，具有较强的抗病毒作用 。ＰｏＩＦＮ α α 组装成的致密蛋白晶体形成的，多角体能