基因工程概论(2).pptVIP

基 因 工 程 概 论 5 2 3 4 1 6 基因工程的基本概念 基因工程的基本原理 基因工程的基本条件 基因工程的操作过程 目的基因的分离克隆 高等植物的基因工程 A 重组DNA技术的理论基础 2 基因工程的基本原理 19世纪中 孟德尔 豌豆杂交试验 遗传因子 经典遗传学 20世纪初 摩尔根 果蝇杂交实验 基因 基因学 1944年 艾弗瑞 肺炎双球菌转化实验 遗传物质DNA 1973年 伯格-杰克森-考恩-鲍耶 DNA分子体外拼接 分子遗传学 1953年 沃森-克瑞克 DNA双螺旋结构 分子生物学 基因工程 B 基因的分子生物学 2 基因工程的基本原理 生物科学理论揭示了基因的化学本质 生物科学理论揭示了基因的遗传功能 基因 调控元件 mRNA 蛋白质 机体构件 功能效应 生物催化 生物性状 生命过程 转录 翻译 反转录 复制 DNA的复制：以亲本DNA为模板合成子代DNA DNA复制所需的基本元件和蛋白因子： DNA复制起始位点（ori ） DNA聚合酶（DNA pol） DNA单链结合蛋白（SSB） DNA解链酶（Rep） A T T T A T Pu T T T A T A A A T A Py A A A T 复制起始位点的核心序列 DNA的复制： DNA复制的基本原理： 5’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ RNA引物 新生DNA链 DNA聚合酶 mRNA的转录：以基因DNA为模板合成mRNA mRNA转录的基本元件和蛋白因子： 启动子（Promoter，P） 终止子（Terminator，T） RNA聚合酶（RNA pol） 5’ 3’ 转录起始位点 启动子 终止子 内含子 外显子 真核生物基因结构（如人类） 5’ 3’ 原核生物基因结构（如细菌） 起始密码子 终止密码子 转录方向 mRNA的转录：以基因DNA为模板合成mRNA mRNA转录的基本原理： 识别启动子 转录的起始 转录的延伸 转录的终止 RNA 聚合酶 启动子 终止子 mRNA mRNA的转录：以基因DNA为模板合成mRNA mRNA转录后的加工： 原核生物的mRNA无需加工，因为没有内含子成分： 5’ 3’ 5’ 3’ 真核生物的mRNA需要加工，因为含有内含子成分： 5’ 3’ 剪切 蛋白质的翻译：以mRNA为模板合成蛋白质 蛋白质翻译所需的基本元件和蛋白因子： mRNA上的5’端非编码区（5’-UTR） mRNA上的密码子 运载氨基酸的 tRNA 核糖体 氨酰基-tRNA合成酶 翻译起始、延伸、终止因子 5’ 3’ 起始密码子 终止密码子 5’-UTR 3’-UTR 编码区 反密码子 挂 氨 基 酸 tRNA mRNA 核糖体 蛋白质的翻译：以mRNA为模板合成蛋白质 蛋白质翻译的基本原理：基因中的密码子连续排列 若缺失一个A 蛋白质翻译的基本过程： GTP GDP 5’ ··· NNNNNNNNNAUGGCUAACCGUUUCGAGCAA··· 3’ 5’ ··· NNNNNNNNNAUGGCUAACCGUUUCGAGCAA··· 3’ 5’ ··· NNNNNNNNNAUGGCUAACCGUUUCGAGCAA··· 3’ 5’ ··· NNNNNNNNNAUGGCUAACCGUUUCGAGCAA··· 3’ GTP GDP P A P A P A P A 结合 转肽 移位 C 基因工程的基本原理 2 基因工程的基本原理 提高外源基因的剂量：分子遗传学原理 安装合适且高效的转录调控元件：分子生物学原理 如：启动子、增强子、操作子、终止子、上游调控序列等 如：SD序列、5’端非编码区、密码子等 安装合适且高效的翻译调控元件，分子生物学原理 平衡基因工程菌（微型生物反应器）的增殖表达：生化工程学原理 D 基因工程的支撑技术 2 基因工程的基本原理 核酸凝胶电泳技术 核酸分子杂交技术 细菌转化转染技术 DNA序列分析技术 寡核苷酸合成技术 聚合酶链反应（PCR）技术 核酸凝胶电泳技术 琼脂糖凝胶板 泳动方向 溴酚蓝 溴乙锭 核酸分子杂交技术 ACCGTAGCTAGGGTTCACACAAATGGCCCGTA CAAGTGTGTTT 细菌转化转染技术 DNA片段 细菌细胞 DNA序列分析技术 双脱氧末端终止测序法的基本反应： Klenow OH 3 5 P T dNTP + ddATP T T T T T OH 3 5 P A G T C GGCATTGCGTTACTAGTCCAGTACA 寡核苷酸合成技术 O H G H H H H O CH 2 O DMT P O Me N CH Me Me CH Me M