血涂片评价及白细胞分类技术质控流程.docVIP

XX医院检验科 文件编号：LJ001 血涂片评价和分类计数质量控制流程 第1版第1次修改 生效日期： 一、血涂片评价质量控制流程 （一）样本采集 将静脉血采集于EDTA－K2抗凝剂中（浓度为每毫升血液含1.5～2.2mg EDTA－K2·H2O）。采血后立即混匀，应拒绝分析有肉眼可见凝块的样本。 血涂片制备 血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。 1、要求所用玻片清洁、干燥、无尘，大小为25 mm×75mm，厚度为0.8～1.2mm。使用载玻片时， 不要用手触及玻片表面。 2、做好明确标记。 3、使用EDTA－K2抗凝血液样本时，应在采集后4小时内制备血涂片。在制片前，样本应充分混匀。注意，样本不能冷藏。 4、每份样本制作3张血涂片。 5、如果样本中白细胞数量少时，需要制备更多血涂片（如6张）。 6、用楔形技术制备血涂片。在玻片近一端1/3处，加一滴（约0.05ml）充分混匀的血液，握住另一张较狭窄的、边缘光滑的推片，从血滴前沿方向接触血液，以30o～45o角使血滴沿推片迅速散开，快速、平稳地推动推片至玻片的另一端。 7、血细胞比容与涂片关系。血细胞比容高于正常时，红细胞较多，血液粘度较高，用较小的角度涂片，可获得满意的血膜。相反，血细胞比容低于正常时，血液粘度较低，需用较大角度涂片。 8、良好血涂片的要求 血膜至少长25mm，至玻片两侧边缘的距离至少为5mm。 血膜边缘要比玻片边缘窄，且边缘光滑，适用于油镜检查。 血细胞从厚区到薄区逐步均匀分布，末端呈方形或羽毛状。 血膜末端无粒状、划线或裂隙。所有这些情况会使白细胞集中在这些区域内。 在镜检区域内，白细胞形态应无人为异常改变。通常，随着保存时间的延长，抗凝血会造成白细胞形态的改变，如胞浆内形成空泡，核分解破裂等。应将抗凝血液保存时间的影响减小到最低限度。除部分淋巴细胞增生性疾病外，镜检区域内破损白细胞量应2％。 无人为污染。 9、 血膜必须充分干燥，否则在染色过程中容易脱落。 （三）血涂片染色 染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的颜色，以便于镜下观察识别。良好的染色能准确鉴别成熟和未成熟白细胞或异常细胞。 1.染料的选择 Romanowsky类染料的质量直接影响染色效果。在pH6.4～7.0条件下，染料与细胞中特定成分（细胞核和细胞浆特殊颗粒）相互作用，产生典型的颜色，如细胞核染深紫色，红细胞染鲜亮的橙红色。粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和其他细胞必须能显示清晰的核浆分界，能识别核染色质成分和细胞浆的颜色差异。本实验室采用BASO公司的商品化试剂瑞-姬染色液，保证了染料的质量。 2.染色效果分析： 2.1可接受的染色情况：血膜外观呈淡粉红色或琥珀色。显微镜下，成熟红细胞呈粉红色。白细胞胞质中颗粒清楚，并显示出各种细胞特有的色彩，细胞核染紫红色，核染色质结构清楚。 2.2染色偏酸：红细胞和嗜酸粒细胞颗粒偏红，白细胞核呈淡蓝色或不着色。 2.3染色偏碱：所有细胞呈灰蓝色，颗粒深暗；嗜酸粒细胞可染成暗褐色，甚至紫黑色或蓝色；中性颗粒偏粗，染成紫黑色。 3.染色过深、过浅的处理 3.1染色过深、过浅与血涂片中细胞数量、血膜厚度、染色时间、染液浓度、pH值密切相关。对于重要的标本可采用先试染的方法，根据试染效果调节第二次染色方式。 3.2纠正染色过深可缩短染色时间或稀释染液。 3.3纠正染色过浅可延长染色时间。 3.4如果标本片有限出现了染色过深、过浅的情况，可用如下办法挽救：染色过深可加少量缓冲液覆盖血膜部分褪色，在显微镜下观察褪色情况及时终止。染色过浅可重加染色液和缓冲液复染，也要在显微镜下观察及时终止。 二、分类计数的质量控制： 1.需分类的外周血有核细胞 外周血可见多种有核细胞。常见的有：中性分叶核粒细胞、中性杆状核粒细胞、淋巴细胞、异型淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞。异常情况下，可有各种幼稚细胞和异常细胞。 2.血涂片检查步骤 2.1血涂片显微镜检查 2.1.1首先在低倍镜下（10倍～40倍）进行浏览，观察有无异常细胞和细胞分布情况。然后，在100倍油镜下，观察细胞浆内的颗粒和核分叶情况。 2.1.2检查从约50％的红细胞互相重叠区域开始，向红细胞完全散开的区域推移。血涂片较薄的区域，呈羽毛状，为“血片边缘”。 2.1.3中性粒细胞，单核细胞和淋巴细胞分布均匀的区域为血涂片分类“可接受”区域。当白细胞总数正常时，在血涂片尾部和边缘，每油镜视野所见的白细胞数量不超过血涂片体部的2～3倍。 2.1.4除某些病理情况（如慢性淋巴细胞白血病）外，破碎细胞或不能识别细胞的数量不超过白细胞总数的2%。若破碎细胞仍能明确鉴别（如破碎的嗜酸性粒细胞）应包括在分类计数中。在结果报告中，应设其他栏