分子生物学实验13级化生一班于喜来1308106030.docVIP

PAGE PAGE 2 13级化生一班 于喜来 1308106030 实验1 PCR 基因扩增 实验目的 通过本实验学习 PCR 反应的基本原理与实验技术。 实验原理 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增 2 n倍。 1．变性：加热使模板 DNA 在高温下(94℃)变性，双链间的氢键断裂而形成两条单链， 即变性阶段。 2．退火：使溶液温度降至 50-60℃，模板 DNA 与引物按碱基配对原则互补结合，即退火阶段。 3．延伸：溶液反应温度升至 72℃，耐热 DNA 聚合酶以单链 DNA 为模板，在引物的引导下。利用反应混合物中的 4 种脱氧核苷三磷酸(dNTP)，按 5′-3′ 方向复制出互补 DNA，即引物的延伸阶段。 上述3步为一个循环，即高温变性、低温退火、中温延伸 3 个阶段。从理论上讲，每经过一个循环，样本中的DNA量应该增加一倍，新形成的链又可成为新一轮循环的模板，经过25-30 个循环后DNA可扩增106-109倍。 典型的PCR反应体系由如下组分组成：DNA模板、反应缓冲液、dNTP、MgCl2、两个合成的D