环氧合酶2基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察.PDFVIP

Med J Chin PLA, Vol. 37, No. 7, July 1, 2012 　545 环氧合酶2基因沉默诱导人肝癌细胞凋亡的作用观察 郭丹，陈娜娜，吴曙光，雷林生 [摘要]　目的　观察作用于环氧合酶2(COX-2)mRNA 的发卡状COX-2(COX-2 shRNA)真核表达质粒对人肝癌HepG2 细胞增殖和凋亡的影响。方法　设计靶向COX-2基因的RNA 干扰序列，构建COX-2 shRNA表达载体，用阳离子脂质 体Lipofectamine 2000转染体外培养的HepG2 细胞。半定量RT-PCR检测COX-2 mRNA表达水平的变化，筛选有效抑制 COX-2基因表达的序列。采用CCK-8细胞计数法检测COX-2 shRNA对细胞增殖的影响，流式细胞仪测定细胞凋亡率 和细胞周期，Western blotting 检测细胞内COX-2和Bcl-2蛋白表达水平。结果　测序结果显示成功构建了2个表达COX- 2 shRNA 的质粒载体，转染HepG2 细胞后COX-2 mRNA表达下降至阴性对照组的41.66% 和77.79% 。选择沉默效率较佳 者转染细胞并经G418