食用菌异迟眼蕈蚊苏云金芽孢杆菌筛选及杀虫蛋白基因鉴定.pdf

浙江大学学报（农业与生命科学版） 45（2）：189~195，2019 JournalofZhejiangUniversity(Agric. Life Sci.) http：///agr E-mail：zdxbnsb DOI ：：10.3785/j.issn.1008-9209.2018.08.141 食用菌异迟眼蕈蚊苏云金芽孢杆菌筛选及杀虫蛋白基因鉴定 1,2 2 2 2 2 2 2 2,3* 1* 王帆帆 ，曲绍轩 ，林金盛 ，李辉平 ，侯立娟 ，蒋宁 ，骆昕 ，马林 ，韩巨才 （1. 山西农业大学农学院，山西 太谷 030801 ；2. 江苏省农业科学院蔬菜研究所，南京 210014 ； 3. 江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室，南京 210014 ） 摘要 苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt ）杀虫谱广，活性高，可以很好地应用于双翅目眼蕈蚊科的防治。 为了筛选出对食用菌异迟眼蕈蚊（Bradysia difformis ）有高毒力的苏云金芽孢杆菌菌株，并进行杀虫蛋白基因鉴 定，采用醋酸钠-抗生素法，从江苏省南京市紫金山土壤中分离产晶体芽孢杆菌，通过室内毒力测定和对食用菌菌 丝影响试验逐步进行筛选，同时进行Bt 杀虫蛋白基因型聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphism, PCR-RFLP ）扩增鉴定。结果从分离到的17株产晶体芽孢 杆菌中筛选出7 个对异迟眼蕈蚊杀虫活性的校正死亡率在50% 以上且不影响食用菌菌丝生长的菌株。经16S rDNA 基因序列同源性分析，这7 株菌与公共数据库中苏云金芽孢杆菌菌株的同源性可达99% 以上，初步认定为 苏云金芽孢杆菌（B. thuringiensis）。Bt 杀虫蛋白基因型鉴定发现，这7 个菌株含有cry4/10、cry11、cyt1、cyt2 等4 个 不同的毒蛋白基因型。筛选出的这7 株Bt 菌株对于防治食用菌异迟眼蕈蚊具有较好的开发利用潜力。 关键词 异迟眼蕈蚊；苏云金芽孢杆菌；杀虫活性；杀虫晶体蛋白基因 中图分类号 S 436.462 文献标志码 A Screening of Bacillus thuringiensis and identification of insecticidal crystal protein gene against Bradysia difformis in mushroom cultivation. Journal of Zhejiang University (Agric. Life Sci.), 2019,45 (2): 189-195 1，2 2 2 2 2 2 2 WANG Fanfan ，QU Shaoxuan ，LIN Jinsheng ，LI Huiping ，HOU Lijuan ，JIANG Ning ，LUO Xin ， MA Lin2 ，3*，HAN Jucai1* (1. College of Agriculture, Shanxi Agricultural University, Taigu 030801, Shanxi, China; 2. Vegetable Research Institute, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014, China; 3. Jiangsu Key Labora