第二讲蛋白质的结构与功能授课用(1).ppt

1986年--硒代半胱氨酸，硒元素取代了半胱氨酸中的硫元素； 2002年--吡咯赖氨酸，赖氨酸的ε-氨基与（4R，5R）-4-取代-吡咯啉-5-羧酸以酰胺键相连而形成的化合物。 是生物体内组成蛋白质的第21和第22种基本氨基酸，均属于L-α-氨基酸。 C.测定蛋白质分子中多肽链的数目 蛋白质末端分析 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质一级结构的测定 D.多肽链断裂成多个肽段 以便建立两个重要的氨基酸序列参考点 可采用两种或多种不同的断裂方法（断裂点不同）将多肽样品断裂成两套或多套肽段，并将其分离开来。 ? 酶解法: 胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、羧肽酶和氨肽酶 ? 化学法：(Cyanogen bromide) 溴化氰水解法，它能选择性地切割由甲硫氨酸的羧基所形成的肽键。 蛋白质一级结构的测定 蛋白质一级结构的测定 E.分析多肽链的N-末端和C-末端残基 以便建立两个重要的氨基酸序列参考点 N末端 二硝基氟苯（DNFB）法 丹磺酰氯（DNS）法 Edman降解法 氨肽酶法 C末端 肼解法 还原法 羧肽酶 蛋白质一级结构的测定 F.片段重叠法确定肽段在多肽链中顺序示意 两套或两套以上不同方法断裂的肽段样品，切口彼此错位，两套肽段正好相互跨过切口而重合，达到互补的目的。 借助重叠肽确定肽段次序： 末端残基 H S 末端肽段 HOWT APS （OUS） 第一套肽段 HOWT OUS EOVE RLA PS 第二套肽段 HO WTOU SEO VERL APS 推断全顺序 HOWTOUSEO VERLAPS 氨基末端残基 H 羧基末端残基 S 第一套肽段 第二套肽段 OUS SEO PS WTOU EOVE VERL RLA APS HOWT HO 举例： 所得资料 核酸推导法 原理：蛋白质的氨基酸顺序是由核酸的核苷酸顺序决定的。 测出核酸的核苷酸顺序 根据三个核苷酸确定一个氨基酸的密码子推导出蛋白质的氨基酸顺序 小结 掌握：片段重叠法确定肽段在多肽链中顺序； 熟记：组成蛋白质的各种氨基酸以及缩写符号； 熟悉：分析多肽链的N-末端和C-末端残基的方法； 蛋白质分子的构象又称空间结构、立体结构、高级结构、三维构象等，是指蛋白质分子中原子和基团在三维空间上的排列、分布及肽链的走向。 蛋白质的分子构象取决于一级结构，是蛋白质生物学功能或活性所必需的。 蛋白质的构象可分为二、三、四级结构。 蛋白质的二级结构 蛋白质的二级结构 定义 是指肽链的主链骨架中若干肽单位，各自沿一定的轴盘旋或折叠形成的有规则的构象，以氢键为主要的次级键。 蛋白质的二级结构中不涉及氨基酸残基侧链的构象。 主链：是由氨基酸的羧基与氨基形成的肽键部分规则的重复排列而成。 侧链：R基部分。 两肽键平面的交接点为α-碳 以肽键为平面连接成多肽长链 注意：α-碳上面接有各种大小不等的基团 肽单位（peptide unit）：肽键与相邻的两个Cα组成的基团 其中肽键具有部分双键性质，不能自由旋转。 肽单位是刚性平面，其上面6个原子处于同一平面，称为 肽平面。 肽链主链上只有两个α碳原子 连接单键可旋转。 肽单位中与C-N相连的氢和氧原子与两个α碳原子呈反向分布。 肽链中的肽平面 蛋白质空间结构单元 β-折叠 (β- pleated sheet) β-转角(β- turn) 环(loop) 无规则卷曲（random coil） Ribbon model of the bacterial catabolite gene activator protein (CAP) α-螺旋 (α- he