8目的基因的克隆.pptVIP

基因克隆的一般流程 载体的选择 基因工程载体一般要求： 能在宿主细胞中复制繁殖，有较高的自主复制能力。 易进入宿主细胞，进入效率越高越好。 合适的多克隆位点（MCS）可接受外源片段，且不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。 易从宿主细胞中分离纯化出来， 便于重组操作。 有筛选标志，当其进入宿主细胞、或携带着外源序列进入宿主细胞都能容易被辨认和分离出来。便于克隆操作。 常用的载体有质粒、噬菌体和病毒等 重组 DNA 技术的一般流程 目的DNA的获得 目的DNA与载体的连接 重组子导入受体细胞 重组子的筛选和鉴定 质粒DNA的酶切反应结果 酶切产物凝胶回收操作步骤（Gel Extraction Kit） 仔细切下含DNA的凝胶，置一称重的1.5ml离心管中。称重。 按300?lS1溶液/100mg凝胶加入的比例加入S1溶液，置50℃水浴10分钟，使凝胶完全溶化，每2分钟颠倒混匀一次。 将溶化后的凝胶溶液移入吸附柱，置收集管中，9000g×30秒，倒掉收集管中的液体，再将吸附柱放入同一收集管中。 在吸附柱中加入500?l W1溶液，9000g×15秒，倒掉收集管中的液体，再将吸附柱放入同一收集管中。重复一次洗柱。 将吸附柱放入同一收集管中。9000g×1分钟。 将吸附柱放入一新1.5ml离心管中，在吸附膜中央加入30?lddH2O，静置1分钟，9000g×1分钟。备用。 重组子的筛选