分子诊断的临床医学应用.ppt

X染色体（xq27.3）的脆性位点 脆性X综合征是遗传性智力缺陷最常见的一种。 致病基因FMR-1的5’端有CGG三核苷酸重复区。 普通男性群体中的患病率为1/4000。 普通女性群体中的患病率为1/6000。 患者智力低下、语言障碍、行为异常、呈特殊 面容。 正常个体：CGG重复次数6~52次，中国人群以(CGG)28为多见。 前突变(premutation)： (CGG) 53~230为携带者，虽表型正常，但在传 递过程中易发生进一步扩展，使后代的CGG重复次数大大增加，并 有异常表型。 全突变： (CGG) ≥230时，100%的男性表现为典型的脆性X综合征, 53%的女性表现为程度不同的智力低下。 遗传性疾病基因诊断的策略 （一）直接诊断策略 基因诊断的直接策略是通过各种分子生物学技术检测基因的遗传缺陷，因此直接诊断的前提是被检测基因的正常序列和结构必须被阐明。 直接诊断由于是直接揭示遗传缺陷，因而比较可靠。 DMD的基因检测 Duchenne muscular dystrophy (DMD) 是一种高发病率、高致残、高致死的X连锁的遗传性疾病，在3500个活产男婴中即有一个患者。 DMD基因的全长为250kb，有79个外显子。 DMD 的最主要遗传缺陷是外显子缺失，约占 60%～70%。 DMD基因外显子的检测 （二）间接诊断策略 间接诊断的实质是在家系中进行连锁分析，通过分析可确定个体来自双亲的同源染色体中的哪一条为致病染色体，从而判断该个体是否带有致病基因。 间接诊断不是寻找 DNA 的遗传缺陷，而是通过分析DNA的遗传标记的多态性估计被检者患病的可能性。 间接诊断：分析DNA的遗传标记的多态性 双等位基因(bi-allele）多态性： 限制性片段长度多态性（RFLP） 第一代DNA遗传标记，所含信息量有限。 检测技术：Southern印迹技术 多等位基因多态性(multi-allele) 小卫星序列 又称串联重复可变数目（variable number tandem repeats，VNTR） 第二代DNA遗传标记 以 6～70bp 为单位，以串联形式排列，构成数量可变的串联重复序列 等位基因常常达10个以上，信息量比 RFLP大 检测技术：PCR 微卫星序列 (microsatellite) 以 2～6bp 为单位，重复次数可达几十次，又称短串联重复序列(STR) 。 在基因组中分布广泛，出现的数目和频率不同，具高度多态性。 检测技术：PCR 单核苷酸多态性(single nucleotide poly- morphism，SNP) 第三代DNA的遗传标记，其多态性仅表现为 单个核苷酸的变异。 在人类基因组中的数目可达300万个，是一种信息量非常大的标记系统。 检测技术：DNA芯片技术 C50: C49: C45: C44: Cjp: 11223 C50: C49: C45: C44: Cjp: 12212 21313 C50: C49: C45: C44: Cjp: 21121 21313 C50: C49: C45: C44: Cjp: 21121 21313 C50: C49: C45: C44: Cjp: 21121 12212 C50: C49: C45: C44: Cjp: 12212 C50: C49: C45: C44: Cjp: 21313 C50: C49: C45: C44: Cjp: 11223 12212 C50: C49: C45: C44: Cjp: 21313 C50: C49: C45: C44: Cjp: 21313 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 凝血因子Ⅷ(F8)基因的主要遗传缺陷 点突变(point mutation) 缺失(deletion) 倒位(invertion)：发生于第22号内含子，可在40%-50%重型HA中检测到 基因检测在监测移