土壤重金属对植物、土壤微生物和土壤酶活性影响的研究.docVIP

土壤重金属对植物、土壤微生物及土壤酶活性影响的研究 课题背景及目的 在当代，人类对资源开发利用包括矿业开采等生产活动不断扩大，其作为一种经济增长的一种重要手段，也引起了一系列经济、社会、环境等问题，不利于可持续发展战略。人类活动及随后产生的废气物随意排放，不仅破坏和占用了大量土地资源，同时也带来了一系列的环境问题如空气、地表水、地下水及土壤的质量下降，生态系统和景观受破坏，生物多样性丧失，农作物减产等。这不仅制约了国民经济的发展、加剧了人与自然的矛盾、破坏了人们的身心健康，同时也不利于我国可持续发展战略的实施。 本研究目的了解土壤重金属对植物、土壤微生物及土壤酶活性的影响原理；掌握分析土壤理化性质、酶学性质、微生物量的能力。 本课题研究的技术 文献调研土壤处理基质样本的采集 文献调研 土壤处理 基质样本的采集 优势植物 样本采集 理化性质分析 酶学性质分析 微生物量测定 植物适应性评价 基质理化性质和生物学性质变化 植物与基质性质关系分析 植物培养 植物样本 室内分析 1.具体实验操作 1.1从农田中取一定重量（50kg）的土壤，可选中一定区域，均匀设置取样点，取土深度保持一致，记录取样地点，时间等； 1.2风干后用2mm孔径的筛子进行过筛； 1.3对剩余土壤进行称重（此时剩余土壤总重量≥50kg）； 1.4取土壤50kg将土壤平均分成5组； 1.5除对照组外，其余4组，分别与不同浓度梯度的CuSO4溶液混匀（Cu2+浓度梯度为0mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg），再将混匀后的土壤平均分成5份； 1.6将这25份土壤装盆，在室内放置一周，并保持湿润； 1.7播种，每个盆中均匀种入油菜种子约30颗； 1.8植物生长过程中，保持各组生长条件一致，一定时间进行浇水，等到盆中油菜长出第二片真叶，进行定植，每盆中保留5-8株植物；在这期间，定期对植物株高、叶片大小进行测量，记下数据； 1.9植物生长一个半月后对植物以及土壤中的微生物和酶活性进行测定。 2.样本室内分析 2.1.土壤中酶活性的测定 实验中土壤酶的测定方法如下 2.1.1土壤转化酶活性的测定-比色法 2.1.1.1试剂配制 （1）3，5－二硝基水杨酸溶液：称0.5g二硝基水杨酸，溶于20mL2N氢氧化钠和50mL水中，再加30g酒石酸钾钠，用水稀释至100mL（不超过7天）。 （2）pH5.5磷酸缓冲液：1/15M磷酸氢二钠（23.876g磷酸氢二钠.12H2O溶于1L蒸馏水中）0.5mL加1/15M磷酸二氢钾（9.078g磷酸二氢钾溶于1L蒸馏水中）9.5mL即成。 （3）8％蔗糖溶液：80g蔗糖溶于1000mL水中 （4）甲苯 （5）标准葡萄糖溶液：将葡萄糖预先在80℃烘至恒重 2.1.1.2操作步骤 称取5g过1mm筛的风干土，置于50mL三角瓶中，注入15mL 8％蔗糖溶液，5mL pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃ 到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1mL，注入50mL容量瓶中，加3mL3，5－二硝基水杨酸，并在沸腾的水浴锅中加热5min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3min。溶液因生成3－氨基-5-硝基水杨酸而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50mL，并在分光光度计上于波长508nm处比色。 每一土壤需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。 在分析样品的同时，取0、1、2、3、4、5、6、7mL葡萄糖工作液，分别注入50mL容量瓶中，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以吸光度为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。 2.1.1.3结果计算 以24h后1g土壤中葡萄糖的质量（mg）表示蔗糖酶活性（Suc）： Suc＝a·V·n/m 式中：a为由标准曲线求得的葡萄糖浓度（mg/mL）；V为显色液体积（50mL）；n为分取倍数；m为烘干土重（g）。 2.1.2土壤过氧化氢酶活性的测定—KMnO4滴定法 称取5g新鲜土壤于100ml三角瓶中。加甲苯0.5ml，摇匀，于0—4℃冰箱放置半小时。取出。立刻加入25ml冰箱储存的含3% H2O2的水溶液。充分摇匀后，再放置0-4℃冰箱半小时。取出立即加入2N H2SO425ml，摇匀，过滤。取1ml滤液，加1N H2SO44ml，用0.1N KMnO4滴定。按此操作，用不加土壤的基质作对照测定，并根据对照和试样0.1N KMnO4的滴定，求出相当分解的H2O2的量的0.1N KMnO4消耗值。 2.1.3土壤脲酶活性测定—苯酚-次氯酸钠比色法 2.1.3.1试剂配制： pH6.7柠檬酸盐溶液：取368g柠檬酸溶于600mL蒸馏水中，另取295g氢氧化钾溶于水，再将两种溶液合并，用1N氢氧化钠将pH调至6.7，并用水稀释至2L。 苯酚钠溶