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波尔山羊胚胎移植技术对比研究 重庆市渝北区畜牧兽医站 李明 摘要：本研究分别采用子宫角移植和输卵管移植两种胚胎移植方法对20只供体母羊和153只受体羊进行胚胎移植。结果发现，虽然输卵管法冲胚平均数达11.6枚，比子宫角法（冲胚平均数为6.59枚）效果好，但是，子宫角法的妊娠率、产羔率和双胎率分别为78%、68%和95%，均显著高于输卵管法。另外，子宫角法的供体母羊生殖系统恢复情况也比输卵管法的好。 1 前言 胚胎移植作为一项高科技的应用生物技术，自二十世纪三十年代，在家兔上首次获得成功以来，相继在绵羊、山羊、猪、牛、马等家畜上获得成功[10]。近年来，我国波尔山羊胚胎移植在季节选择、供受体羊选择、同期发情、超数排卵、配种、采胚和移胚、供受体羊饲养管理和胚胎发育阶段对移植成功率的影响等方面的研究较多[2，4，11]。每头次波尔山羊经过超数排卵、胚胎移植，平均可产6.68（344/50）头羔羊，若1年内1头波尔羊重复2次可获得13.4头羊羔，与常规育种相比极大地提高了纯种波尔山羊的繁殖速度[7]。我们在这些研究的基础上，结合本地特点，对波尔山羊进行了胚胎移植技术对比研究，现报告如下。 2 材料与方法 2.1 药品 阴道栓、FSH (澳大利亚进口)、孕马血清、氯前列烯醇(PG)、CO2 气体、胚胎培养液、麻醉剂、苏醒灵等（上海产）。 2.2 方法 2.2.1 场地准备 30-40m2的房间,分隔为1个缓冲间、胚胎回收和移植手术室2间、1个胚胎操作室。室温保持在22℃-25℃,并用1:150百毒杀室内消毒. 2.2.2 供体选择 供体羊(波尔山羊)为经产2-5胎的母羊，身体健康状况良好,生殖器官正常, 正常繁殖史,繁殖力较高,断奶1个月以上，未孕。 2.2.2 受体选择 受体羊健康状况良好,无生殖器官疾病的适繁母羊。 2.3.3 供、受体羊饲养管理 对供、受体羊进行常规传染病和寄生虫病的防治。饲养管理遵循一般繁殖羊群的原则。保持羊群体况适度,根据羊群营养状况适时调整日粮标准,即增加蛋白质、能量饲料补充料,并注意矿物质和维生素的供应。 2.3.4 供、受体羊的同期发情 供体羊与受体羊同时置入炔诺酮阴道栓，每两天置换一次，一般预处理半个月后和供体同时撤除阴道栓,撤栓后36-48小时观察发情。 2.3.5 供体羊超数排卵 供体羊(波尔山羊)进行超排处理：肌肉注射FSH，每天肌注两次,连续注射4天,第一次肌注2m1,以后每天上、下午各注射1.5ml,最后一天上午注射1.5ml、下午注射0.5 ml，同时每天各注射一次营养液（含各种矿物质、维生素等）2ml/头。注射4天后，撤除阴道栓，38-48小时观察发情。 2.3.6 供体羊配种 选择优质波尔山羊种公羊与供体波尔母羊自然交配,第1次授精在供体母羊发情后8小时进行，随后每隔8-10小时授精1次,共授精4次。 2.3.7 波尔山羊子宫角胚胎移植 供体羊的冲胚：在超排处理授精后第5天回收胚胎,对供体羊采取前低后高半仰姿势(前半身侧卧，后半身仰卧式)保定在手术台上，腹下部剪毛、消毒、全身麻醉,颈静脉注入8-10ml抗菌素。在腹底部偏右侧距乳房基部3-4cm处做一长4-5cm的纵向切口，逐层切开,切开腹膜后,将中指和食指伸入腹腔在骨盆腔前沿膀胱之下触摸子宫角,把子宫角牵引到切口之外,再小心把卵巢引出,检查卵巢黄体发育情况。回收时用套有乳胶管的肠钳夹住子宫角后1/3处, 为防冲洗液流入输卵管,再用血管夹夹住宫管接合部之前的输卵管,在宫管接合部后约3cm处插入进液针头,向子宫内缓慢推入冲卵液,在子宫角用手夹住前端插入一个带有胶管的回收圆针,收集冲胚液,冲胚液用量为30-50ml。一侧冲洗结束时,除去器械,检查针孔,确认无出血现象,安全送于腹腔内,然后按上述同一操作办法进行另一侧冲洗。两侧冲洗完毕后, 为防感染和粘连,将子宫送回腹腔后向腹腔内倒入适量生理盐水,最后逐层进行缝合。 镜检：用倒置相差体视显微镜检查从子宫回收到的冲胚液,鉴定胚胎发育状况。 胚胎保存：用吸卵管吸取发育成熟的胚胎,放入PBSS中保存,在24-26℃下,保存时间不超过4-5小时。 受体羊植胚手术：将受体羊麻醉后采取前高后低半侧卧保定，进行剃毛、消毒,在腹后部、距离两乳头约10㎝处，左右分别打两个孔,左侧放入腹腔镜,右侧注入C02气体,使腹腔膨胀,用腹腔镜检查卵巢黄体发育情况，若有孕妊黄体,且生殖系统无炎症,即作为受体羊,无黄体或黄体过小的受体不能做移植。在两孔中间再打一孔,用长钩钩出子宫角,用早已准备好的装有胚胎(一枚或两枚)的注射器注胚胎于子宫角内。移植结束后,把子宫角送入腹腔,按常规手术要求缝合腹壁创口。 2.3.8 波尔山羊输卵管胚胎移植 供体羊冲胚：供体羊的冲胚手术在授精后68-72小时进行。首先，对供体羊全身