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专题一 基因工程 核心练习题 1. 关于酶的练习题 例：镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变。检测这种碱基序列的改变必须使用的酶是( ) A. 解旋酶 B. DNA连接酶 C. 限制性内切酶 D. RNA聚合酶 答案：C 解析：一个DNA分子中有多个基因，而控制合成镰刀型细胞贫血症血红蛋白的基因只是DNA分子中的一个基因，若要检测其碱基序列，必须将其从DNA分子中切下来，而这个过程则需要限制酶。 答案A：解旋酶用于DNA分子复制 B：DNA连接酶用于目的基因和 运载体的结合 D：RNA聚合酶用于RNA的复制 2. 获取目的的基因技术 例：如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因的一段，或想从一种生物体内获得很多基因，选用下列方法可以获得目的基因的是( ) A. 直接从含有目的基因的生物体内获取 B. 构建基因文库 C. 利用PCR技术扩增 D. 通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成 答案：B 解析：若目的基因序列完全不知，或只知道基因序列的一段，就无法利用A、C、D三项所述方法获得，而只能采用构建基因文库的方法获取目的基因。 3.关于运载体 例：在目的基因操作中，运载体的本质是双链DNA分子，根据已知基因进行定位，下列功能不需要运载体就能完成的是( ) A. 目的基因的转运 B. 目的基因的扩增 C. 目的基因的表达 D. 目的基因的定位 答案：D 解析：目的基因的定位是在含有目的基因的生物体中，根据已知基因进行定位，这时候还没有引入运载体。 4. 蛋白质工程 例：蛋白质工程中，需要直接操作的对象是( ) A. 氨基酸结构 B. 蛋白质的空间结构 C. 基因结构 D. 肽链结构 答案：C 解析：蛋白质工程目标是对蛋白质进行分子设计，但因为基因决定蛋白质，因此归根到底还需对相应的基因进行设计。 5.综合性大题 (2011年青岛市高二质检)如图为某种质粒表达载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、Bam HⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tetR为四环素抗性基因，P为启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、 Bam HⅠ在内的多种酶的酶切位点。 (1)将含有目的基因的DNA与质粒表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有________________________________________________________________________、 ________________、________________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行________。 (2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是________________________________________________________________________。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是________________，其合成的产物是________________。 (4)在上述实验中，为了防止目的基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是 ________________________________________________________________________。 【解析】　(1)将含有目的基因的DNA与质粒用EcoRⅠ酶切开后,可形成许多有相同末端的DNA片段，再用DNA连接酶连接起来后,可形成目的基因与目的基因、目的基因与载体、载体与载体连接的重组DNA分子,而基因工程所需要的是目的基因与载体的连接物,所以对以上三种DNA分子片段进行分离提纯，以获得基因工程所需要的。 (2)质粒是原核生物细胞中的一种DNA分子，所以对以上连接物，只有载体与载体的连接物能生活在原核生物宿主细胞内。而目的基因与载体连接物、载体与载体的连接物都含有完整的青霉素抗性基因，所以可生活在含有青霉素的培养基上。 (3)目的基因表达时，RNA聚合酶与启动子结合，催化DNA分子转录为信使RNA分子。 (4)为了防止目的基因与质粒表达载体的任意连接，可同时选用EcoRI酶与BamHI酶切割目的基因和质粒，这样形成的目的基因两个末端分别有不同的核苷酸序