第五章细胞融合和体细胞杂交10-10.pptVIP

选择融合体或杂种细胞 1.互补选择法 2.机械分离杂种细胞法 3. 双荧光标记选择法 异硫氰酸荧光素（FITC）：绿色 异硫氰酸罗丹明（RITC）：红色 双荧光标记选择法 体细胞杂种植株的鉴定 形态学鉴定 细胞学观察 分子标记 同工酶分析 形态标记 形态标记即植物的外部特征，如花的形状及颜色、耐逆性以及对病的抗性等。形态标记简单直观，但是标记少、多态性差、易受环境条件和其它修饰基因的影响，并且许多性状为数量性状，由几个位点控制，表现为一个范围，而不是简单的性状差异。 细胞学标记 细胞标记主要包括染色体核型(染色体数目、大小、随体、着丝点位置等)和带型(C带、N带、G带等)。细胞学标记位点较少，而且对于亲缘关系较近的物种，由于细胞学标记差别不明显，所以很难根据细胞学特征来区分。 荧光原位杂交（FISH） 优点是可以显示在体细胞杂种中哪条染色体来源于这个亲本，哪条染色体来源于另一个亲本，因而更准确、直观。 分子生物学标记 植物的分子标记主要有RAPD、RFLP、AFLP、SSR、ISSR、EST等。 体细胞杂交育种的意义 1 克服有性不亲和性，实现远源遗传重组，创造新的物种或品系。 细胞融合产生的后代 种内（稳定） 种间（稳定或不稳定） 属间（不稳定），番茄+土豆 = Potamato 科间（不稳定，无植株）， 门间（不稳定，无植株） 问题：与基因工程改造相比有什么优点？ 思考题 人们可以随心所欲地将各个物种细胞融合形成新的生命形式吗？ * 例如：生殖细胞不能融合，或受精卵不能发育，或子代无繁殖能力等。 种内不亲和性：种内个体间的不亲和现象往往是受不亲和基因所制约而并不是染色体组不同的结果。 物种是自然界能够交配、产生可育后代，并与其他种存在有生殖隔离的群体。 细胞中的一组非同源染色体，它们在形态和功能上各不相同，但是携带着控制一种生物生长发育、遗传和变异的全部信息，这样的一组染色体，叫做一个染色体组。 * 一般情况下，通过生殖细胞相互融合而达到这一目的过程称为杂交。较多的是种间、种内杂交。 由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。 * 形成的原因：由不同细胞间胞间连丝的扩展和粘连造成的。 减少自发融合的措施：在用酶液处理之前，使细胞受到强烈的质壁分离药物的作用，切断胞间连丝。 * * Content Layouts NaNO3的钠离子可以中和原生质体表面负电荷，引起原生质体聚集，促进细胞融合。但融合效率低，一般小于4%。 * 钙离子中和原生质体膜或细胞膜表明表面电荷，使彼此紧密接触，决定质膜的稳定性和可塑性；高pH能改变质膜的表面电荷，利于细胞融合。 * PEG分子具有轻微的负极性，可以与具有正极性基团的水分子、蛋白质、碳水化合物形成氢键，在相邻的原生质体间起到分子桥的作用，使原生质体接触。 当PEG分子被洗脱时，膜电荷发生紊乱而重新分配。此时，一种原生质体上带正电的基团可能与另外一个原生质体中带负电的基团相连，导致原生质体融合。 * 在双亲亲缘关系较近的异核体中，两个核有可能同步进行第一次有丝分裂，而且在这个过程中，二者的染色体被一个共同的纺锤体所牵引，在有丝分裂末期形成两个杂种子细胞。最终分化出体细胞杂种，其核内具有双亲的染色体组。 植物的抗逆性多为多基因控制，因此易于实现多基因控制性状。 * Pomato(泡马豆） * 第五章 细胞融合与体细胞杂交 远源杂交 远缘杂交：不同种属之间，或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配称为远缘杂交。 由于种属间存在着种种隔离机制，致使远缘杂交常表现不亲和或获得的远缘杂种表现不育。 不亲和性：在有性生殖过程中，由于个体细胞或组织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能产生后代的现象。 双亲个体间基因型的不协调或是染色体组非同源性在生殖生理表型上的一种反映。不亲和性是稳定物种的重要机理。 种间不亲和性：异种、异属生物个体之间的生殖不亲和现象常由染色体组的不同所造成。一般地说，越是远缘则不亲和性越高，直到完全不能受精。 第六章 细胞杂交（融合）技术 ? 一、定义 1，细胞融合(cell fusion) 广义：凡是将两个细胞或原生质体融合成一个细胞的过程。包括体细胞、性细胞的融合和自发融合。就植物而言，又称为原生质体融合(protoplast fusion)。 狭义：将不同的体细胞融合在一起，通过对杂种细胞的筛选，培养，期望得到体细胞杂种的一种手段。所以又称为体细胞杂交(somatic hybridazation)。细胞融合=原生质体融合=体细胞杂交 体细胞杂交与有性杂交的异同 比较内容 体细胞杂交 有性杂交 时间 无季节限制