微生物常规鉴定技术课件.ppt

微生物常规鉴定技术; 培养特性：指微生物在培养基上所表现的群体形态和生长情况。 形态结构：通过染色，在显微镜下微生物的形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性。 ;细菌的培养特性 固体培养基 菌落大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性 液体培养基 表面生长情况（菌膜、环）、混浊度及沉淀 半固体培养基 穿刺接种观察运动、扩散情况;;细菌的培养特征 ;金葡在不同平板上的菌落特征;沙门氏菌??不同平板上的菌落特征; 固体斜面培养 液体培养基 ;酵母的培养特性 固体培养基 菌落大小、形态、颜色、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征 液体培养基 表面生长情况（菌膜、环）、混浊度及沉淀;酵母的菌落特征;霉菌的培养特性 固体培养基 菌落大小、颜色（正反面）、菌落表面形状、 菌落组织形状 液体培养基 表面生长情况（菌膜、环）、混浊度及沉淀;棉絮状毛霉菌落特征;地毯状青霉菌落特征;绒毛状曲霉菌落特征;放线菌的培养特性 固体培养基 菌落大小、颜色（正反面）、光泽度、质地、菌落表面形状、菌落组织形状 液体培养基 静置培养：表面生长情况（菌膜、环）、沉淀 振荡培养：球状菌丝团 ;产抗菌素的放线菌的菌落特征　　 A：卡特利链霉菌；B：弗氏链霉菌；C：吸水链霉菌金泪亚种；D：卡那霉素链霉菌；E：除虫链霉菌；F：生磺酸链霉菌;（二）形态结构;;; ;弧菌;特殊形态;异 常 形 态;细 菌 大 小;细菌的大小 ;细 菌 细胞结构;芽孢染色法;鞭毛染色法;荚膜染色法;（二）形态结构;（二）形态结构;;分生孢子的形成过程;（二）形态结构;二、微生物生理生化检验;（一）碳水化合物代谢试验;糖（醇、苷）类发酵试验方法;方法 将纯种细菌以无菌操作接种到含有指示剂的培养基中，置35℃温箱培养数小时至两周，观察结果。;糖（醇、苷）类发酵试验结果;应用： 主要用于肠杆菌科的鉴定。;原理：细菌分解葡萄糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖； 发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G; 产碱型：细菌在有氧、无氧环境中都不 分解葡萄糖;;方法： 取2支HL葡萄糖培养管煮沸，待冷后接种菌种。一管管口敞开，一管用液体石蜡封管，培养18~24h观察结果。;葡萄糖氧化/发酵试验结果;应用： 主要用于革兰阴性杆菌的鉴别。 ;原理： 有β-半乳糖苷酶的细菌，可以分解邻硝基酚 β-半乳糖苷(ONPG),而释放黄色的邻硝基酚。 应用： 常用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴定。 ;β-半乳糖苷酶试验（ONPG）方法;β-半乳糖苷酶试验（ONPG）结果;原理： 七叶苷可以被细菌分解为葡萄糖和七叶 素，七叶素与培养基中的Fe2+反应，形成黑 色化合物，使培养基变黑。;方法： 将待检菌接种于七叶苷培养基上，培养后观察结果。 ;甲基红试验;方法： 将待检菌种接种于葡萄糖蛋白胨水中,35℃培养6～18小时后,往培养基中加入甲基红指示剂少许,观察结果。;原理： 某些细菌分解糖类→丙酮酸→继续脱羧→ 乙酰甲基甲醇（碱性）→空气氧化→双乙酰 +α-萘酚、肌酸→红色化合物。;V-P试验;（二）蛋白质类代谢试验;原理： 含有色氨酸酶的细菌，能分解色氨酸产生吲哚， 吲哚能与对二甲氨基苯甲醛作用，形成红色玫瑰吲哚。;吲哚（靛基质）试验;硫化氢试验;方法： 将细菌穿刺接种到醋酸铅培养基中， 35℃、24～48h，观察结果。;苯丙氨酸脱氨酶试验;苯丙氨酸脱氨酶试验;原理： 产生尿素酶的细菌,能分解尿素产生氨和CO2,氨在溶液中形成碳酸铵，使培养基变碱，酚红指示剂变红。;方法： 将待检菌接种于尿素培养基中，35℃培养 18～24h取出观察。 ;枸橼酸盐利用试验 硝酸盐还原试验;枸橼酸盐利用试验;枸橼酸盐利用试验;原理： 使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其 成为亚硝酸盐或其它还原物。培养基中的亚硝酸基能 与α-萘氨和苯磺酸形成红色的N-α-萘氨偶氮苯磺酸。 若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。 ;方法： 取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35℃ 培养18~24小时，然后依次加入含α-萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。;（四）酶类试验;原理： 某些细菌具有细胞色素氧化酶，能将二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺试剂氧化成紫红色 醌