猪瘟免疫荧光抗体染色技术的应用体会.pdfVIP

维普资讯 福建畜牧兽医 第29卷 第2期 2007年 猪瘟免疫荧光抗体染色技术的应用体会 洪 英 福建省动物疫病预防控制 中心 福州 350003 摘 要 用猪瘟荧光抗体染色检测猪瘟病毒，特异性强、准确率高，但是病料的选择、试剂效价等影响其检 出率，且弱毒疫苗免 疫后一段时间也影响到检测结果。在实验室操作中，病变组织的取样、弱毒疫苗等影响如何克服，仍是猪瘟荧光抗体染色检测 的关键 。 关键词 猪瘟 荧光检测 应用 中图分类号：$851、4 文献标识码：B 文章编号：1003—4331(2007)02—0020—02 猪瘟荧光抗体染色技术，是将提纯后的抗猪瘟 对每份病料中的淋巴结、肾、脾、肠管、肺等分别切片 病毒抗体 I 标记上荧光物质，制成猪瘟荧光抗体 染色后观察得出的结论是淋巴结的阳性检出率最 染色试剂。用该试剂去着染猪病料(如病猪扁桃体、 高，脾脏次之，肾脏再其次。说明同一头猪，不同脏 淋巴结、肾等)的冰冻切片或触片，然后利用荧光显 器的检出率是有差别的。用猪瘟荧光抗体染色技术 微镜观察组织细胞 内是否有亮绿色荧光。如果被观 检测猪瘟病料，选准病料是提高检出率的关键。 察的组织细胞内有亮绿色荧光，就是猪瘟荧光抗体 笔者在兽医临床工作中重视在采集病料样本 染色阳性，说明被检病料中有猪瘟病毒感染。反之， 时，首先要问清病史，确定病理变化部位，选取合适 被观察的组织细胞 内没有亮绿色荧光，就是猪瘟抗 的病变器官。一般来说，急性过程的病猪可采取扁 体染色阴性。猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高致 桃体、淋巴结、脾脏；慢性病猪采淋巴结、脾脏、肾脏； 性、死亡率极高、危害严重的猪烈性传染病。每年猪 对慢性病例采淋巴结时以肠系膜淋巴结为好 2。所 瘟给我国的养猪业带来巨大的经济损失，我国采取 采病料都必须是外观有明显病理变化或出血病变的 了一系列有效的防控措施，基本防止了该病的大流 部位 。 行。现在有成熟的诊断技术和确实可靠的疫苗，许 2 制备阳性参照物 多国家应用疫苗免疫和防疫抗体水平监测，已经消 免疫荧光抗体试剂是用高效价、高纯度的特异 灭了猪瘟。这为世界范围内消灭猪瘟提供了可能。 性抗猪瘟抗体(I )进行荧光标记而成，在激发光的 由于近几年来猪瘟疫情越来越严重，特别是猪 作用下产生肉眼可见的亮绿色荧光。这种亮绿色荧 群免疫抑制病的发病流行，给猪瘟的预防工作带来 光在短时间内减弱，时间长了就消失。因此，试剂生 不确定因素，临床上又陆续出现各型猪瘟病例。由 产商不提供阳参照片。这样在实际工作中，给实验 于猪瘟病例在临床上的特征性症状和病理变化都变 室工作带来一些麻烦。比如，荧光抗体试剂在有效 得不典型，实验室的病原诊断成为了该病关键的常 时间内，多次使用后，抗体效价会降低，特别是出厂 规检验方法。猪瘟病原学成熟的诊断方法有许多， 时就稀释成使用液的试剂，效价更容易降低。还有 例如免疫荧光抗体染色技术、病毒分离鉴定、ELISA、 在制片、染色、洗片、显微镜光源等一些影响结果判 PCR等技术。笔者所在的实验室在诊断猪瘟的过程 定的因素每个实验室都必须一一摸索、固定。如果 中，各种技术都曾使用过。通过对各种诊断技术的 设定 自己已知的阳性飞片，已知阳性病料的切片就 比较，笔者认为猪瘟荧光抗体染色技术具有检测时 可以对荧光抗体试剂进行评价，摸索确定实验室条 间短、操作简便、结果直观、准确率高等特点，优于其 件，为结果的判读提供依据。笔者在实际工作中，曾 它方法。根据近几年工作实践，以下就这些问题谈 对多家试剂公司提供的荧光抗体试剂进行比较，阳 几点体会，供同行参