薄层层析分离方法.ppt

薄层层析分离技术 Thin-layer chromatography ;Thin-layer chromatography and column chromatography and are different types of liquid chromatography. The mobile (moving) phase is a liquid. The stationary phase is usually silica or alumina. This phase is very polar. The principle of operation is the same!;Thin Layer Chromatography;Stationary Phase: Silica (SiO2);Stationary Phase: Alumina; ;Thin-Layer Chromatography: A Two-Component Mixture;Be sure to remove the TLC plate when it appears that the solvent front isn’t moving! Reason: the solvent is evaporating as it moves up the plate. Results: If you don’t remove the plate all of the spots will appear near the top of the plate!!!!! This isn’t a pretty sight and makes it difficult to get good Rf values! ;Visualization Method;Thin-Layer Chromatography: Determination of Rf Values;Thin-Layer Chromatography: Qualitative Analysis;1、 薄层色谱：薄层色谱法，是将适宜的固定相涂布于玻璃板上，成一均匀薄层。等点样、展开后，与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用以进行药品的鉴别，杂质检查或含量测定的方法。 ;2 仪器与材料： 2.1 玻板：除另有规定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的规格，要求光滑，平整、洗净后的不附水珠，晾干。 ;2.2 固定相或载体：最常用的有硅胶G、硅胶GF、硅胶H、硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。其颗粒大小，一般要求直径为10—40μm。薄层涂布，一般可分无粘合剂和含粘合剂两种；前者系将固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合剂，一般常用10—15%煅石膏（CaSO4·2H2O在140℃烘4小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤维素钠水溶液（0.5—0.7%）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。也有含一定展开液或缓冲液的薄层。 ;2.3 涂布器：应能使固定相或载体在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。 2.4 点样器：常用具支架的微量注射器或定时毛细管，应能使点样位置正确集中。 2.5 展开室：应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严密盖子，除另有规定外，底部应平整光滑，应便于观察。;各种特制薄层 混合薄层 酸碱薄层和pH缓冲薄层 络合薄层 : 用AgNO3。等无机试剂的水溶液代替水调硅胶糊来铺制络合薄层 涂布固定液的薄层 高效薄层:它是由粒度十分均匀，直径最小为5μm，—般为10μm左右的硅胶吸附剂，加上高度惰性的粘合剂，铺成质地十分致密、平滑的高效高层预制板。这种预制板性能极稳定，层析展开后所得斑点仍保持圆形不拖尾，分离清晰，分离效果极好。理论塔板高度最小可达12μm，一般在20～30μm。展开3~7cm，理论塔板数可达数千，为一般薄层的十倍。 ;;3 操作方法： 3.1 薄层板制备：除另有规定外，将1份固定相和3份水在研钵中向一方向研磨混合，去除表面的泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂布（厚度为0.2—0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干，后在110℃烘30分钟。即置有干燥剂的干燥箱中备用。使用前检查其均匀度（可通过透射光和反射光检视）。;3.2 点样：除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样基线距底边2.0cm，点样直径为2—4mm，点间距离约为1.5—2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面。 ;3.3 展开：展开室如需预先用展开剂饱和，可在室中加入足