妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇胎盘床中HIF—1α的表达及临床意义.docVIP

PAGE PAGE 1 妊娠期肝内胆汁淤积症孕妇胎盘床中HIF—1α的表达及临床意义 　　[摘要]目的探讨缺氧诱导因子HIF-1α在妊娠期肝内胆汁淤积症（ICP）患者胎盘床中的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测HIF-1α在22例正常妊娠胎盘床组织和21例ICP胎盘床组织中的表达。结果22例正常妊娠胎盘床组织HIF-1α阳性表达9例，总阳性率为40.91%，21例ICP胎盘床组织中HIF-1α阳性表达15例，总阳性率为71.43%，两组间差异有统计学意义（P0.05）。结论HIF-1α在ICP患者胎盘床组织中的高表达，从蛋白水平证实HIF-1α可能是ICP患者缺氧的一个敏感指标。 　　[关键词]缺氧诱导因子HIF-1α；妊娠期肝内胆汁淤积症；免疫组织化学；胎盘床 　　[中图分类号]R714.2[文献标识码]B[文章编号]1673-9701（2013）16-0044-02 　　缺氧诱导因子（hypoxia-induciblefactors，HIF）广泛存在于哺乳动物和人类的多种组织细胞中，是细胞在缺氧环境中产生的具有转录活性的核蛋白，受缺氧信号调控，是调节细胞内氧代谢的关键因子，与胎盘胎儿发育密切相关，是一个关键调节者，在正常和病理妊娠中起重要作用[1，2]。已有文献报道，HIF异常与妊娠相关缺氧性疾病，如胎儿生长受限、子痫前期等有关[3，4]。妊娠期肝内胆汁淤积症（intrahepaticcholestasisofpregnancy，ICP）是发生于妊娠中晚期的一种严重的并发症，其发病率有明显的地域和种族差异，以瘙痒和黄疸为主要症状，该病使早产、胎儿窘迫发病率升高，且胎儿死亡常常突然发生，具有难以监测和预料的特征，是导致围产儿病死率升高的主要原因之一。ICP与胎儿急慢性缺氧密切相关，本文采用免疫组化SP法研究ICP患者胎盘床组织细胞中HIF-1α的表达，从蛋白水平探讨ICP发生缺氧的可能机制。 　　1资料与方法 　　1.1研究对象 　　选择2010年6月～2011年6月在杭州师范大学附属医院产科因ICP、胎位不正、社会因素等择期行剖宫产分娩的单胎产妇43例，分为对照组22例、ICP组21例，所有病例均排除内科合并症及妊娠并发症。ICP组诊断标准参照《妇产科学》[5]，对照组及ICP组孕妇平均年龄、孕产次、孕周、新生儿出生体重、新生儿Apgar评分均无统计学意义（P﹥0.05）。 　　1.2标本的采集与处理 　　胎盘床组织结构包括底蜕膜及其邻近的子宫浅肌层，参照Dixon等[6]的方法获取胎盘床标本，标本的收集均获得患者本人的知情同意。即在剖宫产胎儿娩出后，确定胎盘附着子宫壁位置，剥离胎盘，暴露胎盘床，于胎盘脐带附着位置子宫壁楔形取材，大小约1.0cm×1.0cm×0.5cm，包括底蜕膜及其下的子宫浅肌层。压迫或缝合活检造成的破损区止血，随着子宫的收缩，创面迅速止血闭合。所取标本用生理盐水漂洗干净，10%福尔马林液固定，酒精脱水，石蜡包埋、切片，光镜观察肌层有滋养细胞浸润者为胎盘床，免疫组化染色。 　　1.3实验方法 　　采用SP法进行免疫组化染色。常规石蜡切片，热修复抗原，滴加兔抗多克隆抗体一抗HIF-1α（ab51608）（购自Abcam公司）1：150稀释，室温（约20℃）孵育1h，滴加二抗（购自丹麦DAKO公司），室温孵育1h，DAB（试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司）显色，苏木素复染，中性树脂封片，阅片，图像分析。 　　1.4图像分析 　　由专业的病理科医生对切片进行阅片，200倍光学显微镜下随机选择5个不同视野，观察所选择的高倍镜视野中所有的细胞，以细胞浆和（或）细胞核中出现棕黄色或褐色颗粒为阳性细胞。根据细胞染色强度和细胞阳性百分率得分之和进行判定：①着色强度：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色2分，棕褐色为3分；②细胞阳性率：50%为3分；以上两结果相加为免疫组化积分：0分为阴性（-），1～2分为（+），3～4分为（++），5～6分为（+++），（+）～（+++）定为阳性表达。 　　1.5统计学处理 　　所有实验数据采用SPSS16.0统计软件包进行处理，采用χ2检验，P﹤0.05为差异有统计学意义。 　　2结果 　　HIF-1α在对照组及ICP组胎盘床组织的底蜕膜及其下的子宫浅肌层中滋养细胞的胞浆和胞核均有表达，以胞核表达为主，对照组阳性表达率40.91%，ICP组HIF-1α蛋白阳性表达率71.43%，两组间差异有统计学意义（P﹤0.05），见表1及图1。 　　3讨论 　　缺氧诱导因子（HIF）与胎盘胎儿发育密切相关，是哺乳动物及人类体内重要的转录调节因子，受缺氧信号调控，参与缺氧诱导多种基因的转录过程，在细胞对缺氧反应中起着关键作用。其中主要发挥生物学效应的是HIF-1α，它对缺氧