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免疫学及免疫学检验 REVIEW QUESTION The specificity of the reaction of antigen with antibody is usually highly dependent upon 1)molecular weight of the antigen 2)charge of the antibody 3)immunoglobulin isotype 4)conformation of the reactants 免疫学及免疫学检验 沉淀反应 （precipitation reaction) 毛旭虎 医学检验系临床微生物学及免疫学教研室 二OO六年二月 免疫学及免疫学检验 可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀 免疫学及免疫学检验 1897年 Kraus 就发现细菌培养液（毒素）与相应 抗血清混合出现沉淀 1905年 Bechhold 把抗体放在明胶中，将抗原加于 其中，发现沉淀反应可在凝胶中进行 1946年 Oudin 报告了试管免疫扩散技术 1965年 Mancini 提出单向免疫扩散技术，使定性 免疫试验向定量化发展 免疫浊度法的出现，使沉淀反应达到快速、 微量、自动化的新阶段。 免疫学及免疫学检验 根据沉淀反应的介质和检测方法的不同,沉淀反应可分为: 液相内的沉淀反应 凝胶内的沉淀反应 免疫学及免疫学检验 (一) 原理 把抗原溶液小心地加于已含抗体溶液的细试管液面上。当对应的抗原与抗体相遇，在界面处形成清晰的乳 白色沉淀环。 免疫学及免疫学检验 (二) 操作步骤 1. 用毛细滴管吸取抗血清加于沉淀管(内径 约1.5~2mm)底部，避免产生气泡。 2. 将抗原溶液沿管壁缓缓叠加于抗血清液面上，形成清晰的交界面。 3. 置沉淀管于室温下使其反应，1~5min内 在两界面间呈现乳白色沉淀环为阳性。30min仍无沉淀环出现则为阴性。 免疫学及免疫学检验 (三) 方法评价 该试验是经典的血清学反应之一，简便、快速、实用。故用于鉴定血迹和诊断炭疽(Ascoli试验)。只能定性，不能定量、敏感性较低(3~20mg/L)，对含有多个抗原抗体对的反应系统缺乏分辨力。方法难以推广。 免疫学及免疫学检验 三、免疫浊度试验 经典的免疫沉淀试验是抗原和相应抗体在反应终点时判定结果，方法存在耗时、敏感度低(10~100mg/L)和不能自动化等缺点。70年代以来，根据抗原和抗体所在液相内快速结合并产生浊度的原理，建立了免疫比浊法。临床常用3种微量免疫技术，即透射比浊法(transmission turbidimetry)、散射比浊法(nephelometry)和免疫胶乳比浊法(immunolatex turbidimetry)，借助多种自动化分析仪器来完成。 免疫学及免疫学检验 (一) 透射比浊法 1. 原理 抗原抗体在一定缓冲液中形成免疫复合物(IC)，当光线透过反应溶液时，由于溶液内复合物粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，免疫复合物量越多，透射光越少，即光线吸收越多，可用吸光度表示。吸光度和复合物的量成正比，当抗体量固定时，与待检抗原量成正比。用抗原标准品建立标准曲线，可测出待检抗原含量。 免疫学及免疫学检验 2. 操作步骤 (1) 用稀释缓冲液将待检样品和标准品按规定稀释，取一定量加至测定管中。 (2) 加最适工作浓度(用方阵法预先滴定)的抗体，孵育一定时间，测定吸光度(A)值。 (3) 以不同浓度抗原含量为横轴，吸光度为纵轴，绘标准曲线。从标准曲线可得待检抗原量。