1抗原抗体反应实验06jing.pptVIP

抗 原 抗 体 反 应 实 验 antigen-antibody reaction  抗原抗体反应 概念 基本原理 特点 影响因素 应用范围 一、概念 抗原和抗体的特异性结合反应 体内 产生保护效应 造成病理损伤 体外 多种表现形式:凝集,沉淀,补体结合,中和等. 二. 基本原理 抗原和抗体分子结构及立体构型的互补 抗原-抗体结合力 疏水作用,氢键,范德华引力,静电吸引作用 The concept of Ag-Ab interaction 三. 特点 特异性和交叉反应 可逆性 一定条件下（低pH、高浓度盐、冻融等） →抗原-抗体可被解离 最适比例 反应体系中抗原/抗体最适比例 →决定反应结果的关键因素 四. 影响因素 (一) 反应物自身因素 1. 抗体 * 来源: 不同动物免疫血清具反应差异。 * 特异性与亲和力：难以两全其美。 * 浓度：必须滴定抗体。 2. 抗原 * 理化性质、表位多寡和种类 (二) 环境条件 1. 电解质 不可缺少 2. 酸碱度 pH 6-8 3. 温度 15-40?c 4. 时间 规定时间 五. 应用范围 用已知抗原检测未知抗体 用已知抗体检测未知抗原 大分子物质 药物、激素和炎性介质等各种半抗原物质 免疫沉淀反应(precipitation) 原理 可溶性抗原+抗体?白色沉淀 内容 单向定量免疫电泳(火箭电泳) 琼脂糖双向免疫扩散 单向定量免疫电泳(火箭电泳) 把抗原放在含有抗体的凝胶内电泳，其沉淀弧形似火箭。 当定量的抗原在含有适量抗体的琼脂中泳动时，走在前面的抗原遇到琼脂中的抗体时，达到适当比例时形成大的不溶性复合物而发生沉淀，不再移动； 未与抗体结合的抗原以及较小的可溶性复合物可穿过此沉淀继续向前迁移，形成新的沉淀，但沉淀带越来越窄，直至全部抗原与抗体结合形成火箭峰样沉淀。 抗原含量越高，火箭峰越长。 单向定量免疫电泳(火箭电泳) 将抗体混入琼脂内; 将待测样品（抗原）加入琼脂一端的加样孔中，进行电泳; 抗原在电泳时与抗体反应，比例合适时形成锥形沉淀峰（形如火箭）, 峰高与抗原含量成正比; 以标准抗原的浓度为横坐标，峰高为纵坐标，绘制标准曲线，即可根据峰高从标准曲线中得出待测样品中的抗原含量。 * 实验流程 抗体+琼脂?琼脂板 ? 打孔数个(孔与板缘距离1cm) ? 加入样品(由低浓度到高浓度) ? 电泳 打 孔 将胶版置于模板上，用打孔器在琼脂板的一端垂直，间隔均匀地打一排小孔，用针头小心，完整地挑出孔中琼脂 加 样 每孔小心加入10?l 样品 1－5孔加入1:32, 1:16, 1:8,1:4,1:2的标准品 剩下一孔加入待测样品。 实验步骤 1. 取熔化并冷却至50°c的1%琼脂糖凝胶，加入 anti-IgG抗体，混匀后浇至玻璃板上。 2. 凝固后，如下图打孔。 3. 第1-5孔加入10 ?l 经倍比稀释的标准血清样品------ 1:32，1:16，1:8，1:4，1:2。第6孔加入待测血清。 4. 将琼脂板放入电泳槽，用滤纸与电泳槽搭桥连接， 样品孔一端接负极。电泳80v， 2~3h。 实验步骤 Rocket eletrophoresis 琼脂糖双向免疫扩散 实验原理： 将Ag与Ab两种溶液置于琼脂糖凝胶的不同位置，使两者都在凝胶中自由扩散，抗原与抗体相遇并在比例合适处形成可见的乳白色沉淀线。 沉淀线的数目、位置、形状等，与抗原或抗体的纯度、浓度、扩散速度等有关。 琼脂糖双向免疫扩散 * 实验流程： 铺制琼脂糖凝胶板 ? 打孔(梅花型) ? 中心孔内加入抗IgG血清,其余加入待检血清，37 ?c，24h。 实验步骤 将已溶化的1%生理盐水琼脂糖3~4ml倾注在玻片上制成厚薄均匀的凝胶板。待凝固后，打梅花孔（如下图）。 在中心孔内用加样器加入10?l anti-IgG血清（抗体）。 在第1~5孔内分别加入10 ?l 经系列倍比稀释--- 1：32， 1：16 ，1：8, 1：4， 1：2的待测血清样品（