第3章菌种的选育-2.pptVIP

第三章 工业菌种的选育 工业菌种的育种： 是运用遗传学原理和技术对某个用于特定生物技术目的的菌株进行的多方位的改造 目的： 强化 现存的优良性状 去除 不良性质 增加 新的性状 亚硝基胍诱变曲霉菌 N—甲基—N‘-硝基-N-亚硝基胍(NGN，MNNG或TG)对真核或原核微生物都有强烈的诱变作用。 其精确的作用机制尚不很清楚，据认为是伴随着重氮甲烷的生成及在酸性条件下生成亚硝酸，直接作用于细胞内的DNA复制系统，从而诱发了变异。 MNNG的诱变作用随pH的升高而增强。 (二)操作步骤 1．单孢子悬液制备 取斜面，加入6ml 0.1mol／L pH6.0的磷酸缓冲液，用接种环刮下孢子，振荡试管，立即通过带滤纸漏斗过滤，由此制得单孢子悬液，若孢子液浑浊状，其孢子浓度可达l06个／ml，此为待处理孢子悬液。 2．MNNG溶液的制备 用分析天平称取2mg，加入2ml 0.1mol／L pH 6.0磷酸缓冲液，于暗处振荡溶解。 3．诱变处理 吸取MNNG溶液lml，加入到1m1孢子悬液中，30℃振荡30min，立即稀释1000倍停止作用，然后以10-2，10-4两个稀释度分离培养，30℃ 3天后计数。 4．死亡率计算 将未处理的孢子液1ml加入1ml磷酸缓冲液中，同上逐级稀释分离， 30℃下培养3天。根据处理前后的活孢子数可计算出死亡率。 5．挑取菌落进行糖化酶及蛋白酶产量筛选． 第二节 营养缺陷型的选育 营养缺陷型是指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质如氨基酸、维生素和碱基等的能力，必须在其基本培养基中加入相应的营养成分才能正常生长的变异株。 与营养缺陷型对应的是野生型。 能满足野生型菌株正常生长的培养基称基本培养基(MM)； 在基本培养基中加入相应的营养成分的称补充培养基(SM)； 能满足各种营养缺陷型生长的称完全培养基(CM)，如牛肉膏蛋白胨培养基、麦芽汁培养基等。 营养缺陷型的用途 营养缺陷型在生产上和科学研究上用途很大。目前生产氨基酸、核苷酸的菌种都是各种类型的缺陷型。要研究代谢途径，育种技术都必须有营养缺陷型的菌株为材料。 在育种工作中，很多突变高产菌株是营养缺陷型菌株。 筛选营养缺陷型的步骤 诱变 淘汰野生型 检出缺陷型 确定生长谱 第三节 其他育种方式 杂交育种、原生质体育种 第四节 筛选新的代谢产物 一、开发新的代谢产物的途径 (1) 从自然界分离新的微生物菌株，或采用新的检阅方法筛选新的代谢产物。 (2) 对已知微生物的代谢产物进行化学修饰。 (3) 利用微生物转化改造代谢产物的结构。 (4) 通过原生质体融合获得新的代谢产物。 (5) DNA重组技术。 二、筛选微生物新的代谢产物的程序 突变型菌株的筛选 一、产量性状突变株的筛选 三、筛选微生物代谢产物的目标 筛选克服抗生素抗性菌株的活性物质； 筛选抗肿瘤、抗病毒的活性物质； 研究有药理活性的酶抑制剂及免疫调节剂； 寻找食品工业最好的酵母培养物； 筛选降解有害物质的微生物以及治疗上具有低毒、长效的化学药物等。 四、筛选微生物代谢产物的方法 (一)直接方法 为了尽快确定微生物代谢产物的利用前途，在体外试验测得活性后，可以将培养液的有效成分直接作用于机体，观察被测样品的疗效。 这种直接确定代谢产物用途的方法亦称动物体内治疗试验。 (二)间接方法 筛选医用抗生素，可用细茵、真菌、病毒或肿瘤模型，寻找抗细菌、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤抗生素、酶抑制剂、免疫制剂等有效物质。 在预筛选时，多用琼脂平扳扩散抑菌法。通过预筛选，直接测定最初分离物的生物活性，能加速筛选过程。 * * *