生物物理技术-2.pptVIP

* 红外光谱振动光谱信息与主要参量 吸收带的位置(nmax , cm-1) :红外光谱是红外吸收随入射光波数变化的曲线. 谱峰强度: 由于消光系数对环境敏感，特征基团在不同分子中波动很大，因此红外的谱峰强度只用强strong、中meso、弱weak表示。 * Application * H2O protein 紫外 吸收谱 红外光谱 * Cefradine 头孢拉定 * Melamine * * Application in biosystem 吸收带 cm-1 振动模式指认 酰胺A 3300 N-H伸缩振动 酰胺B 3100 酰胺Ⅱ的一次泛频，费米共振 酰胺Ⅰ 1660 C=O伸缩振动 酰胺Ⅱ 1570 N-H面内弯曲振动和C-N伸缩振动 酰胺Ⅲ 1300 C-N伸缩振动和N-H面内弯曲振动 酰胺Ⅳ 630 O=C-N面内弯曲振动 酰胺Ⅴ 730 N-H面外弯曲振动 酰胺Ⅵ 600 C=O面外弯曲振动 酰胺Ⅰ带80%来自于C=O基的弱伸缩振动和C=O旁的C-N伸缩振动以及N-H平面内弯曲振动的偶合 * cm-1 对应二级结构 1624±4 伸展肽链 1631±3 伸展肽链 1637±3 伸展肽链 1645±4 无规卷曲 1653±4 螺 旋 1663±4 转 角 1671±3 转 角 1675±5 伸展肽链 1683±2 转 角 1689±2 转 角 1694±2 转 角 * Conformational transition: from alpha-helix rich to beta-sheet rich PrPc朊蛋白 PrPsc朊病毒（致病因子） * IR Image * Lipids (cell walls) Nucleic acids (DNA, RNA)  Proteins Each of these major classes of cellular components have distinct IR markers Infrared spectra are obtained from individual living cells. Infrared Spectromicroscopy of Individual Living Cells * 脑功能成像 * Raman spectroscopy * h? h?’ ? = ?’ Rayleigh scattering Prof. C.V. Raman ? ≠ ?’ Raman scattering 1930年诺贝尔奖 * 拉曼散射效应的进展： 拉曼散射效应是印度物理学家拉曼（C.V.Raman）于1928年首次发现的，本人也因此荣获1930年的诺贝尔物理学奖。 1928~1940年，受到广泛的重视，曾是研究分子结构的主要手段。这是因为可见光分光技术和照相感光技术已经发展起来的缘故； 1940~1960年，拉曼光谱的地位一落千丈。主要是因为拉曼效应太弱（约为入射光强的10-6），并要求被测样品的体积必须足够大、无色、无尘埃、无荧光等等。所以到40年代中期，红外技术的进步和商品化更使拉曼光谱的应用一度衰落； 1960年以后，激光技术的发展使拉曼技术得以复兴。由于激光束的高亮度、方向性和偏振性等优点，成为拉曼光谱的理想光源。随探测技术的改进和对被测样品要求的降低，目前在物理、化学、医药、工业等各个领域拉曼光谱得到了广泛的应用，越来越受研究者的重视。 * 瑞利 散射 电子能级基态 电子能级激发态 反 Stokes 线 虚能态 Stokes线 IR Virtual state * 1) 在示意图中斯托克斯线和反斯托克斯线对称地分布于瑞利线的两侧，这是由于在上述两种情况下分别相应于得到或失去了一个振动量子的能量。 2) 反斯托克斯线的强度远小于斯托克斯线的强度，这是由于Boltzmann分布，处于振动基态上的粒子数远大于处于振动激发态上的粒子数。 高频 低频 * * * * 拉曼光谱参量 峰位:是电子能级基态的振动态性质的一种反映。以入射光和散射光波数差表示。 峰位的移动与激发光的频率无关，反映的是分子振动能级的性质。 2. 强度: 与浓度成正比 * * 1.对同一物质而言二光谱常常相当近似。 2.拉曼光谱一个很重要优点:水不会干扰其测量，更适 合于测试生物样品。 3.玻璃和石英容槽皆可使用，可避免使用溴 化鉀、氯化鈉等会在湿气中潮解或其他对大气不 稳定的视窗时的不便，即此类光谱容易获得。 4.拉曼光谱有一个很重要的问题就是样品或样品中 的不纯物会有荧光干扰，但这方面可以使用FTIR 克服它，所以