医学细胞设计性实验.pptVIP

实验项目一：动物细胞融合 实验原理 两个或两个以上的细胞在自发或诱导条件下合并成为一个双核或多核细胞的过程成为 。在通常情况下，两个细胞接触并不会发生融合现象。因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定变化，就可以促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继而细胞质融合，形成一个大的融合细胞，在自然界的 就是细胞融合的过程。 细胞融合 受精 目前，细胞融合的诱导物种类很多，常用的主要有灭活的仙台病毒，聚乙二醇（PEG）和电脉冲。目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得，简单，且融合效果稳定。 实验用品 （1).材料：鸡血 。 （2).试剂：Hanks液,PEG溶液(MV=400)，1640液（含10%灭活小牛血清和不含血清的两种），0.85%生理盐水，0.2%次甲基蓝染 (3).仪器设备：显微镜(800r/min)，离心机，水浴箱，酒精灯，吸管，载玻片、盖玻片，滤纸。  混合液离心(800r/min离心) 8ml hanks液混匀 实验步骤 8min 静置1min后 37℃水浴 PEG溶液 热的1640液混匀 37℃水浴保温 悬浮 离心洗涤 流尽剩余液体 鸡血 10%悬液 融化 冷却至50℃ 90S内 加入Hanks液 含小牛血清的1640液 0.2%次甲基蓝染染液染色 镜检 37℃水浴 5min 离心弃上清 10min 吸纸吸干 37℃水浴 孵育30min 注意事项 1.制备50%PEG一定要保温在37℃水浴中，不然冷却后会有结晶析出。 2.在离心管中加PEG之前，一定要将离心管倒置在滤纸上，流尽液体，否则残留液会改变PEG的浓度。 3.融合过程观察：分别于温育5min、10min、20min、30min取细胞悬液一滴制成临时装片。 两个细胞核发生 ，形成一个含有两个或多个核的圆形细胞。 预期结果 融合 细胞融合过程 实验原理： 实验项目二：细胞核的分离与鉴定 细胞核。 细胞内各种结构的比重和大小都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不同，用不同的转速和不同的介质离心，就可以将细胞内各组分分级分离出来。 细胞核的分离就是利用了细胞核的比重大小与细胞内其他组分不同，先将组织制成匀浆，再在悬浮的均匀介质中进行离心，分离，甲苯胺蓝又可以将细胞核染成蓝紫色，这样，就可以鉴别分离出来的细胞核。 实验用品： 材料：小白鼠 试剂：生理盐水,0.25mol/L蔗糖，0.003mol/L氯化钙溶液，1%甲苯胺蓝染液 仪器设备：显微镜，普通离心机，天平，离心管，滴管，玻璃漏斗，量筒，25ml烧杯，解剖剪，镊子，冲洗瓶，纱布，伯乐均浆器，载玻片，盖玻片，染色盘架 实验步骤： 断头处死小白鼠 迅速开腹取肝 加8ml预冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L绿化高永液于烧杯中， 将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆器，是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿。 尽量剪碎肝组织，取1克放入烧杯中 左手握持匀浆器右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆，直至看不到明显的组织块 过滤匀浆液于离心管中 离心 取上清液制一张涂片1 将原离心管中剩余上清液吹打成沉淀成悬液另制涂片2 滴染甲苯胺蓝染液 滴染甲苯胺蓝染液 镜检 注意事项： 1.操作规范，防止试剂污染。 2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。 3.使用离心机要注意平衡，转速从低到高。 预期结果： 低倍镜下找到标本，再换高倍镜，可见肝细胞核已游离出来，被染成蓝紫色，圆形，中央有2到4个甚至更多个深蓝色的核仁。 设计组名单 姓名 学号 王正旭 1120150135 罗秀 1120150136 徐鹭 1120150137 汪俊成 1120150138 张磊 1120150139 吴霞 1120150140