血红蛋白的提取与分离(课件-.pptVIP

5.电泳法的原理？（9组） 学生展示 2.原理： ①许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的PH下，这些基团会带上正电或负电。 ②在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。 ③电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小，形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。 基础知识 影响蛋白质分子运动速度的因素 ? 决定 运动方向 形成 库仑力 形成 阻力 决定 运动速率 电荷性质 电荷量 分子形状 分子大小 √ √ √ √ √ √ √ 基础知识 血红蛋白的提取与分离 3、基本单位：氨基酸 蛋白质小知识（回忆） 氨基 NH2 COOH 羧基 H R —C— 导入新课 1、含量：占细胞干重的50％以上，是细胞中含量最多的有机化合物。 2、组成元素：C、H、O、N（主要） 4、分子结构： 氨基酸 多肽 蛋白质 肽键：—CO—NH— 脱水缩合 盘曲折叠 导入新课 5、相对分子质量：高分子化合物 学习目标 学习目标： 1、了解色谱法分离生物大分子的基本原理和方法；（重、难点） 2、了解电泳法分离生物大分子的基本原理和方法； 1.分离生物大分子的基本思路是什么？ （10组） 2.蛋白质的分离和提取的原理是什么？提取分离方法？（5组） 3.凝胶色谱法的概念？凝胶色谱法的原理？（3组） 4.缓冲溶液的概念、作用？ （1组） 5.电泳法的原理？（9组） 6.聚丙稀酰胺凝胶电泳原理？SDS作用机理？（7组） 自学引导 展示任务 1.分离生物大分子的基本思路是什么？ （10组） 学生展示 1.分离生物大分子的基本思路： 选用一定的物理或化学的方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 基础知识 2.蛋白质的分离和提取的原理是什么？提取分离方法？（5组） 学生展示 3、提取分离方法 凝胶色谱法 凝胶电泳法 基础知识 2.蛋白质分离和提取的原理： 根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等等，可以用来分离不同种类的蛋白质。 3.凝胶色谱法的概念？凝胶色谱法的原理？（3组） 学生展示 2.凝胶： 大多数凝胶是由多糖类化合物（如葡聚糖或 琼脂糖）构成的多孔小球体，内部有许多贯穿的通道。 根据被分离的蛋白质相对分子质量的大小，利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，来进行分离。 1.概念： （一） 凝胶色谱法（分配色谱法） 基础知识 3.原理： 当不同的蛋白质通过凝胶时 相对分子质量较小 相对分子质量较大 凝胶内部的通道 容易进入 无法进入凝胶内部的通道 只能在凝胶外部移动 路程较长 移动速度较慢 路程较短 移动速度较快 相对分子质量不同的蛋白质因此得以分离。 凝胶色谱法分离蛋白质的原理 直径大小 运动 方式 运动 速度 运动 路程 洗脱 次序 相对分子质量大 相对分子质量小 较大 较小 垂直向下的运动 无规则的扩散运动 较快 较慢 较短 先流出 较长 后流出 4.缓冲溶液的概念、作用？ （1组） 学生展示 （二）缓冲溶液 1.概念: 在一定的范围内，凡是能够抵制外加少量强酸或强碱的影响使原来溶液PH值基本保持不变的混合溶液。 能够抵制外界的酸和碱对溶液PH值的影响，维持PH基本不变。 2.作用: 基础知识 3.缓冲溶液的配制: 通常由1－2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同PH范围内使用的缓冲液。 思考：说出人体血液中缓冲液。 NaH2PO4 / Na2HPO4 H2CO3 / NaHCO3 基础知识 4.提问：在本课题中使用的缓冲液是:____ , 其目的是: 利用缓冲液模拟细胞内的PH环境，保证血红蛋白的正常结构和功能，便于观察(红色)和科学研究(活性) 磷酸缓冲液 基础知识 （三） 电泳： 1.概念： 带电粒子在电场作用下发生迁移的过程。 基础知识