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细菌生理生化反应 2010.10 ~ 2010.12 目的要求? 学习并掌握细菌分类鉴定中常用的 生理生化反应。 实验原理 细菌的代谢与呼吸，主要取决于酶的催化作用，各种细菌具有不同的酶系统。 不同的细菌分解大分子碳水化合物、蛋白质和脂肪的能力不同，所能发酵的类型和终产物也不一样。 细菌代谢类型的多样性，具体表现在生化反应多样性，因此在细菌分类鉴定中，常利用其生理生化反应作为重要依据。 糖发酵试验 在肠道细菌的鉴定上尤为重要 细菌可发酵的基质 糖（葡萄糖、蔗糖、乳糖） 醇（甘露醇） 糖苷（甘油） 发酵后产生的有机酸 乳酸、醋酸、丙酸等 发酵后产生的气体 甲烷、氢、二氧化碳等 葡萄糖发酵试验乳糖发酵试验 指示剂：溴甲酚紫（变色范围pH5.2-6.8, pH5.2黄色，pH6.8紫色） 安装倒立的徳汉氏氏小管（内充满液体） 乙酰甲基甲醇试验（V.P.试验）甲基红试验（M.R.试验） 细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，所产生的丙酮酸，可被进一步代谢。 细菌体内丙酮酸代谢途径的不同，可通过V.P. 和M.R. 这一对实验进行鉴别。 V.P.反应阳性途径： 吲哚产生试验 判断细菌是否（含色氨酸酶）能利用色氨酸。 实验材料 1. 大肠杆菌 （Escherichia coli） 2. 产气肠杆菌 （Enterobacter aerogenes ) 3. 普通变形杆菌(Proteus vulgaris) 实验方法与步骤 （一）液体培养基的制备与灭菌 1）蛋白胨培养基： 蛋白胨 4.0 g NaCl 2.0 g H2O 400 mL 调pH 7.6，分出2管，然后加0.5ml 1.6 % 溴甲酚紫乙醇溶液,溶液呈浅紫色；分装到装有倒立的德汉氏小管的试管中（6管） 2）10%葡萄糖溶液，10%乳糖溶液各20ml 112度，30分钟灭菌 3支德汉氏管中加葡萄糖溶液各1ml 3支德汉氏管中加乳糖溶液各1ml 3）葡萄糖蛋白胨培养基： 葡萄糖 0.5 g 蛋白胨 0.5 g K2HPO4 0.2 g H2O 100 mL 分装2管 （二）接种培养 （三）反应结果鉴定 葡萄糖/乳糖发酵试验 直接观察。 VP试验：去塞，加40％KOH 10滴，再加等量5%α－奈酚，用力振荡，37℃培养30min，观察。 吲哚试验：加1ml乙醚（作用是萃取出吲哚）。振荡，静止片刻使分层，沿管壁慢慢加入吲哚试剂10滴，观察。 * 细菌生理生化反应 氧化还原和电极电势 自定义内容 实验中心网站：/*** * 氧化还原和电极电势 自定义内容 * 氧化还原和电极电势 自定义内容 pH5.2, 溶液由清亮紫色变为浑浊黄色 乳酸、醋酸、丙酸 葡萄糖/乳糖 甲烷、氢、二氧化碳 徳汉氏小管内有气泡，产气漂浮 产气肠杆菌 大肠杆菌 4．吲哚试验 产气肠杆菌 大肠杆菌 3． VP试验 不接种 普通变形杆菌 大肠杆菌 2．乳糖发酵 不接种 普通变形杆菌 大肠杆菌 1．葡萄糖发酵 对照 （管数） 被接菌种2（管数） 被接菌种1（管数） 试验名称 * 细菌生理生化反应 实验中心网站：/***