生物化学RNA的生物.pptVIP

第十二章 RNA的生物合成 第一节 RNA聚合酶及RNA转录的一般特点 RNA聚合酶 原核生物RNA聚合酶 E.coli的RNA聚合酶是由四种亚基组成的六聚体 （?2?????） 转录的模板连与编码链 转录是的不对称性 对于一个基因只有模板链转录；对于不同基因模板链并非总在同一DNA链上。 RNA链的延长方向是5′→3′ 二、转录与复制的异同点 第二节 真核生物的转录过程 启动子（promoter）：位于结构基因上游，供RNA聚合酶及某些转录因子辨认结合，并启动转录的一段特异DNA序列。 Ⅰ类启动子(RNA聚合酶Ⅰ)；Ⅱ类启动子(RNA聚合酶Ⅱ)； Ⅲ类启动子(RNA聚合酶Ⅲ) 转录因子（TF）：直接或间接与RNA聚合酶及模板DNA相互作用的蛋白因子。参与转录启动。 TFⅠ(RNA聚合酶Ⅰ)；TFⅡ(RNA聚合酶Ⅱ)； TF Ⅲ(RNA聚合酶Ⅲ) 一、mRNA的合成 （一）起始阶段 1. 启动子(Ⅱ类) （一）转录起始阶段 转录起始阶段—转录前起始复合物的形成 在转录因子的协助下，RNA聚合酶启动子结合并解链形成转录泡，并产生第一个3′，5′-磷酸二酯键。 RNA链的第一个核苷酸多为嘌呤核苷酸，最常见为鸟嘌呤核苷酸 （二）转录的延长阶段 转录的延长阶段—RNA聚合酶沿DNA模板不断移动，DNA不断解链，RNA链不断延长，转录后的DNA单链不断重新形成双链 （三）转录的终止 转录的终止—出现转录终止的剪切信号序列 （二） rRNA的合成 1.rRNA基因的结构特点 2.rRNA转录的起始 三、 5SrRNA和tRNA的合成 1.tRNA基因的结构特点及转录起始 2. tRNA转录的起始 5SrRNA 转录的起始 第三节 真核生物RNA转录后的加工 初级转录产物：转录生成的尚不具有生物活性的RNA分子 转录后加工：初级转录产物经过一系列的变化后具有生物活性的过程 加工过程包括：核苷酸部分水解、连接反应、加帽、加尾以及核苷酸修饰等 一、mRNA的加工 真核成熟mRNA的前体称为不均一核RNA（hnRNA） （一）切除内含子，连接外显子。 发生在细胞核里。 外显子（exon）：hnRNA分子中编码氨基酸的序列 内含子（intron）：hnRNA分子中不编码氨基酸的序列 大多数内含子的5′为GU，3′为AG。 剪接体（酶）催化内含子切除和外显子的连接 催化的机理是亲电转酯反应 内含子的功能：有些内含子在基因表达中起作用；有些内含子可为酶编码 （二）hnRNA的5′端加“帽” （三）hnRNA的3′加“尾” 发生在细胞核里。 （四）hnRNA的甲基化修饰 发生在核内或胞质内 （五）RNA编辑：指改变mRNA分子中的碱基而使同一基因表达出不同的蛋白质。如碱基的插入、缺失、置换、错义突变或提前产生终止密码子 二、rRNA的加工 三、tRNA的加工 切除多余的序列（内切酶）并连接（连接酶） 个别碱基甲基化（tRNA甲基转移酶） 核苷内的转位反应（假尿苷生成） 脱氨反应（A转变为I） 还原反应（双氢尿嘧啶的生成） 第四节 原核生物RNA的合成 原核生物的启动子序列 研究方法：RNA-pol保护法 分离基因 加入提纯的RNA-pol 加入核酸外切酶 保护区碱基序列组成分析 -35区是RNA-pol对转录起始的辨认位点 -10区主要供RNA-pol结合。 一、原核生物RNA合成的起始 转录起始是指RNA-pol辨认、结合启动子,并前移形成第一个3′，5′-磷酸二酯键的过程 二、原核生物RNA合成的延长阶段 σ因子与核心酶脱离，核心酶沿模板链向前移动RNA链不断延长。 三、原核生物RNA合成的终止阶段 转录的终止—RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。 转录终止的两种机制： 非依赖ρ因子的转录终止 依赖ρ因子的转录终止 1. ρ因子依赖性的转录终止 ρ因子的功能：能与转录产物RNA结合;具有ATP酶和解螺旋酶活性 2. ρ因子不依赖性的转录终止 RNA分子中产生的茎环结构使RNA聚合酶变构，转录停顿；使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。 四、原核生物RNA的加工 （一）原核mRNA不需加工 原核生物mRNA合成与翻译同时进行 （二）原核生物rRNA转录后的加工 （三）原核tRNA的加工 切除多余的序列（内切酶）并连接（连接酶） 个别碱基甲基化（tRNA甲基转移酶） 核苷内的转位反应（假尿苷生成） 脱氨反应（A转变为I） 还原反应（双氢尿嘧啶的生成） 第五节 RNA的复制 RNA的复制：以进入宿主细胞的病毒RNA为模板，在RNA复制酶的催化下合成病毒RNA的过程。 （一） RNA复制酶 １. RNA复制酶的发现 1963年在噬菌体Qβ（RNA噬菌体）中发现RNA复制酶。该酶只识别病毒