第10章高效液相色谱法.ppt

* (2)蒸发光散射检测器(ELSD) 1)原理：粒子对光的散射 2)组成：喷嘴、漂移管、光电管 3)定量依据：E=Kmn * (3)荧光检测器 1)原理：物质分子的荧光吸收 2)优点：固有的灵敏度和选择性 3)缺点：应用不广泛 * (4) 其他检测器 示差折光检测器(RID) 电化学检测器(ECD) 红外检测器 介电常数检测器 放射性检测器 MS检测器 NHM检测器 * 高效液相色谱条件选择 1、柱内展宽 涡流扩散项A 纵向扩散项B/u 提高柱效方法 流动的流动相的传质阻力项Csmu 静态流动相的传质阻力项Csmu 固定相的传质阻力项Csu 2. 柱外展宽 提高柱效方法 * 选择流动相溶剂的原则 k2的大小主要取决于流动相溶剂的极性α主要取决于流动相溶剂的选择性 改善分离度的方法 * 实验条件对分离的影响 A 温度：反相色谱流动相当为含有机溶剂的水溶液时，粘度较高，最好在较高柱温下操作，以减少粘度，柱温一般在30~400C。最高可达800C。 B pH 值：对于可溶解的组分，改变流动相 pH 值，可以改变分离的选择性，采用一定 pH 值的缓冲溶液作流动相，可以抑制组分的离解。减少峰的拖尾。 * 注意流动相： 物理性质 极性 选择性 使用前处理 * 物理性质 （1） 对检测器的适应性 （2） 溶剂的粘度和沸点 （3） 溶解特性 * 流动相的物理性质 （1） 对检测器的适应性： 示差折光检测器：流动相的折射率与样品折射率有差别。折射率差别越大检测器的灵敏度越高。 紫外检测器：必须选择紫外切点小于检测器波长的溶剂作流动相。 荧光检测器：流动相的紫外切点必须小于检测器所使用的激发光波长，流动相不能引起荧光淬灭。 * 流动相的物理性质 （2） 溶剂的粘度和沸点： 溶剂的粘度影响色谱分析的分辨率：在色谱分析中尽量选择粘度小的溶剂，提高分辨率。但溶剂的粘度小往往沸点也低，容易挥发，在色谱过程中容易产生气泡，干扰检测器的工作；在使用两种不同溶剂的混合物做流动相时，还容易改变不同溶剂的比例，降低分析结果的重现性。 因此沸点过低的溶剂不适宜做流动相，流动相的沸点至少应比色谱分析的温度高30度。 * 如：乙醇的价格虽低，但粘度较大沸点略高；甲醇的粘度较小沸点最低，价格适中；乙腈的粘度最小沸点较低，但价格较高；在HPLC中常用甲醇作流动相。 * 流动相的物理性质 （3） 溶解特性： HPLC 要求组成流动相的溶剂彼此能够互相溶解。 * * 溶剂的极性 溶剂的极性：溶剂分子与溶质分子间的相互作用能力的大小。 这种能力是色散力、偶极距作用、氢键作用及介电的相互作用。这四种力作用的总和越大，溶剂的极性越强。 * 使用前的处理 （1） 溶剂常用分析纯或HPLC级。水要用超纯水或去离子的双蒸馏水。 （2） 流动相用0.2~0.5mm滤膜过滤。 （3） 过滤后用超声波或氦气等脱气。 （4） 处理好的流动相充氮气保存。 * 洗脱方式 1. 恒组成溶剂洗脱 2. 梯度洗脱 又称为梯度淋洗或程序洗脱 在一个分析周期内，按一定程序不断改变流动相的浓度配比。 * 梯度洗脱的优点: 可以明显缩短分析时间 组分出柱时扩展带窄，峰形基本对称且灵敏度增加 提高分辨率 * 液相色谱的定性分析 (1) 保留时间：在色谱条件固定后，被分析化合物的保留时间是固定的。 (2) 光吸收比法：一种化合物在两种不同波长的光吸收比是一个常数。不同化合物在两个固定的波长的光吸收比往往不同。因此光吸收比是鉴别不同化合物的一个很有用的办法。 (3) 荧光：只有少数化合物能发射荧光，可以结合荧光和保留时间来鉴别色谱峰。 * 液相色谱的定量分析 （1）归一法： （2）外标法： （3）内标法： * 应 用 药材质控 原料药质控 制剂质控 * 色谱的有关文献 《高速液相色谱》(High Speed Liquid Chromatography) 化学文摘服务部，俄亥俄州 《液相色谱文摘》(Liquid Chromatography Abstracts) 科学技术文摘社，伦敦 《液相色谱文摘》 (Liquid Chromatography Abstracts) Preston 技术文摘公司，伊利诺斯州 《色谱杂志》(Journal of Chromatography) 《液相色谱杂志》(Journal of Liquid Chromatography) * * * * * * * * 液-固色谱的应用 (1) 主要用于脂溶性化合物的分离：如磷脂、甾体化合物、脂溶性维生素、前列腺素等。 (2) 分离几何异构体： 如维生素A的几何异构体。 (3)分