HIV感染的实验诊疗讲义.pptVIP

HIV感染的实验诊疗 一、HIV感染后的免疫和病毒学 HIV的基因组结构和蛋白 基质 衣壳 核衣壳 表面糖蛋白 跨膜糖蛋白 蛋白酶 反转录酶 整合酶 HIV结构基因,有3个 env(核苷酸5781--8360)编码包膜蛋白p160、120、41等。 gag(核苷酸310--1860)编码病毒核心/衣壳蛋白p55、24、15、17； pol(核苷酸1629--4673)编码逆转录酶(RT)、p66、51、32、11等； HIV调节基因,有6个 tat:上调mRNA,促病毒复制-启动 rev:调节病毒mRNA-开关 vif:增强出芽,释放新病毒颗粒-感染因子 nef:下调mRNA,抑病毒复制-制动 vpu:仅见于HIV-1,功能不详； vpx:仅见于HIV-2,功能不详。 5 days 脑部：巨嗜细胞和胶质细胞 淋巴系统: 胸腺 淋巴结 脾脏 肠道：嗜铬细胞 前列腺精液 阴道黏液 骨髓 肺胞巨嗜细胞 血液 细胞积存: CD4+T 淋巴细胞 巨嗜细胞 胶质细胞 嗜铬细胞 ? Image from: Kahn and Walker, M.D. NEJM 1998, Volume 339:33-39 July 2 感染HIV后的血清学变化 HIV RNA 浓度 p24Ag P24 Ag Anti-gp41,120,160 Anti-p24,55 感染 1周 2周 6周 12周 8－10 年 急性期 潜伏期 艾滋病期 检出线 HIV-1早期感染病毒标志物的动态观察 HIV RNA HIV p24 antigen HIV antibodies 窗口期 血浆RNA P24 前病毒 DNA HIV抗体:ELISA HIV抗体:WB HIV感染者的三种临床转归 Virus CD4 CD8 aHIV CD4 CD4 CD8 CD8 aHIV Virus Virus 典型 8－10 y 快速 : 4-5 y : (2%) 缓慢/长期不进展 : 10 y : (2%) 二、HIV酶联筛查检测方法和试剂 ※感染急性期 ， 窗口期 ※检测试剂以ELISA为主，还有PA，斑点免疫胶体金和免疫层析。 ※ELISA试剂为HIV1/2型，包括M和O组，N组不包括但很少。 ※ 三四五代酶联试剂的差异和使用策略： 三代成熟质量稳定，窗口期20d;四代提前4－9d，质量不稳定，用于血站急性感染的检测。 ※ 筛查试验和确认试验的差异： 酶联试验敏感性高于确认试验，四代试剂敏感性更高，确认阴性的不一定是真阴性。 （一）HIV抗体ELISA检测试剂（血液） 第三代：双抗原夹心法，可检测所有类型抗体，由于能检出IgM抗体，缩短了窗口期，有报道说较第二代产品平均可提前5天作出诊断。 第四代：双抗原（抗体）夹心法，将HIV P24抗体和HIV抗原同时包被，再加入待检血清，最后加入酶标记的HIV抗原和HIV P24单克隆抗体，同时检测血清中的HIV P24抗原和HIV抗体。 第五代：HIV抗体和P24抗原实现分别检测，真正实现早期诊断。 Fourth Generation Third Generation Second Generation IgM IgG 各种HIV检测方法平均窗口期 方法 平均天数 第2代EIA 45 第3代EIA 22 P24抗原 16 HIV RNA 11 （二）、检测试剂的质量指标 灵敏度 诊断试验的灵敏度有两个不同意义： 1．代表一个试验能检测最少量被分析物（如抗体）的能力。通常可对阳性血清进行稀释以确认哪个试验更敏感。 2．指某试验检出阳性的能力（无假阴性）。一个试验有可能检出很少量的某抗体，但也可因试验中缺少适当的抗原而漏掉一些阳性样品。 2．特异性 指某试验正确鉴定所有阴性的能力（无假阳性）。大部分HIV筛查试验不是100%特异，可用公式计算 真阴性 特异度= ———————— ? 100% 真阴性+假阳性 注：公式中真阴性指试验中所能检测的真阴性数。 如100份血清，5份真阳性，95份真阴性，与参考试验比较，某试验检出6份阳性（一份假阳性），则 ?特异性=94/(94+1)×100%=98.9%