基因工程的原理和技术讲义.ppt

基因工程的原理和技术;第二节 基因工程的原理和技术;剪切;问题：获取目的基因的方法有哪些？;大片段DNA;如何从基因文库中获取目的基因?;构建基因组文库，获取目的基因;一.基因工程的基本操作步骤（技术）;思考：从基因组文库中获取人的胰岛素基因，导入大肠杆菌能否成功表达？为什么？;思考： 能否根据mRNA合成没有内含子的胰岛素基因？;单链RNA （mRNA);一.基因工程的基本操作步骤（技术）;;思考：基因文库如同国家图书馆，而cDNA文库则像某单位的图书馆，二者除了大小不同之外，还有哪些区别？ ;问题：获取目的基因的方法有哪些？;一.基因工程的基本操作步骤（技术）;问题：获取目的基因的方法有哪些？;思考：能否根据氨基酸的序列获得人胰岛素基因的碱基序列？;化学合成法;一.基因工程的基本操作步骤（技术）;问题：获取目的基因的方法有哪些？;聚合酶链式反应（PCR技术）;双链DNA;思考：PCR技术扩增目的基因，需要什么前提和条件？过程如何？原理是什么？;一.基因工程的基本操作步骤（技术）;第一个循环;; 人工基因合成法;一.基因工程的基本操作步骤（技术）;质粒;同一种限制酶切割;;;问题2：形成的重组质粒导入受体细胞后，除了能够稳定存在外，并且可以遗传给下一代。同时，使目的基因在受体细胞中表达和发挥作用，需要对重组质粒作怎样的修饰？;(二)形成重组DNA分子（构建基因表达载体);用BamHⅠ对胰岛素基因和质粒切割，加入DNA连接酶，得到的都是重组质粒吗？;含目的基因的DNA片段; 双酶切连接：;(三)将目的基因导入受体细胞;重组质粒; 感受态：细胞处于容易吸收外源性DNA的状态。 处于感受态的细胞称为感受态细胞.;(三)目的基因导入受体细胞;如果是导入动物细胞;(三)目的基因导入受体细胞;思考： 1、如果是导入植物细胞，最好以什么细胞为受体细胞？一般采用的运载体又是什么？ 2、比如：培育抗虫棉，怎样操作才能成功导入？;农杆菌转化法;农杆菌转化法;3. 转基因植物;利用压缩气体产生的动力，将包裹在金属颗粒（有钨粉粒子和金粉粒子，粒子的直径一般在0.6～4um）表面的表达载体DNA打入受体细胞中，使目的基因与其整合???表达的方法。 这是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本太高。 ;花粉管;3. 转基因植物;(三)目的基因导入受体细胞;按照基因表达顺序逐步检测，逐步过关;思考：通常为什么要选用含有两个标记基因的运载体？;没有质粒;;DNA分子杂交法检测目的基因;DNA分子杂交法;检测转基因生物体内是否已含有目的基因;检测转基因生物体内是否已含有目的基因;检测目的基因是否已翻译出了蛋白质;检测转基因生物体内是否已含有目的基因;;(四)目的基因的检测与鉴定;;基因工程的基本操作程序;二.基因工程的原理;例1 科学工作者分离得到了某真核生物的基因A，将其解离成两条具有互补关系的单链，其中的一条与基因A的信使RNA进行配对，杂交后可以观察到如图所示的结构．对此结果的合理解释是（　） A．1、3、5、7为DNA/RNA的杂交体，2、4、6为单链DNA部分 B．1、3、5、7为DNA/RNA的杂交体，2、4、6为单链RNA部分 C．1、3、5、7为双链DNA部分，2、4、6为DNA/RNA的杂交体 D．1、3、5、7为单链RNA部分，2、4、6为DNA/RNA的杂交体;例2.质粒是基因工程中最常用的运载体，质粒上有标记基因（如图所示），通过标记基因可以推知外源基因（目的基因）是否转移成功。外源基因插入的位置不同，细菌在培养基上的生长情况也不同。右图表示外源基因插入位置（插入点有a、b、c），请据下表细菌生长情况，推测①②③三种重组细菌与外源基因插入点相对应的一组是 ;例3.培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因,只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程. ;; 例4.科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组，并在大肠杆菌中成功表达。下图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程。请据图回答问题;典型例题1：;答案; 把正常基因导入目标细胞，以纠正或补偿基因缺陷，达到治疗的目的。;蛋白质工程：;例：T4溶菌酶