基因工程的原理和技术宣讲讲义.ppt

基因工程的原理和技术宣讲;补充：基因的结构;染色体;原核生物的基因结构;区分：启动子与起始密码 终止子与终止密码;真核生物的基因结构;1.简述基因工程原理及基本操作程序。 2.尝试设计某一转基因生物的研制过程。;基因操作的基本步骤;基因工程的操作步骤;基因工程的操作步骤;基因工程的操作步骤; 获取目的基因方法①： 从基因文库中获取目的基因;;基因组文库与cDNA文库的比较;如何从基因文库中获取目的基因？;获取目的基因方法②： 利用PCR技术扩增目的基因; DNA复制的过程涉及DNA双链的方向。通常将DNA的羟基（-OH）末端称为3’端，而磷酸基团的末端称为5’端。;DNA复制的方向; DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只能从3’端延伸DNA链。因此，DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后，DNA聚合酶就能从引物的3’端开始延伸DNA链。;复习：DNA复制;思考： DNA复制需要哪些成分和反应条件？ 如何在体外设置一个类似的DNA复制环境？; DNA双链复制的原理（遵循碱基互补配对原则）; 变性;获取目的基因方法③ DNA合成仪用化学方法直接人工合成;①目的基因的获取； ②表达载体的构建； ③将目的基因导入受体细胞； ④目的基因的检测与鉴定。 单独的目的基因（DNA片段）是不能稳定遗传的。 为了使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传 给下一代，同时使目的基因能正常表达和发挥作用， 必须构建表达载体。;第二步：基因表达载体的构建;基因表达载体;;①目的基因的获取； ②表达载体的构建； ③将目的基因导入受体细胞； ④目的基因的检测与鉴定。 含有目的基因的表达载体只有进入受体细胞，并且维持稳定和表达，才能实现一种生物的基因在另一种生物中的转化。;第三步：将目的基因导入受体细胞;农杆菌特点：生活在土壤中，能够在自然条件下感染 双子叶植物和裸子植物，受植物体伤口处的细胞分泌的大量酚类化合物的吸引，农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞染色体的DNA上。;我国科学家独创的一种方法 实例：我国的转基因抗虫棉;2）将目的基因导入动物细胞;1）早期基因工程为什么选用原核生??作为受体细胞？ 原核生物繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 2）应用最为广泛的受体细胞是大肠杆菌 3）方法： ;思考4:利用大肠杆菌能生产人的糖蛋白吗?;1.将目的基因导入植物细胞;基因工程操作步骤的必要性;;第四步：目的基因的检测和鉴定;DNA分子杂交技术; 探针是一小段单链DNA或者RNA片段（约20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。 根据重组质粒上目的基因的部分DNA序列，人工合成（或PCR技术合成）与之互补的一小段单链DNA（或RNA) ,利用带有32P-磷酸的dATP使其标记上放射性同位素，这一小段与目的基因的部分序列互补的核酸分子称为DNA探针。 ;基因探针与目的基因杂交，观察标记有无杂交带; 将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交; 不能，受体细胞必须合成相应的蛋白质或表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。;第四步：目的基因的检测和鉴定;抗原—抗体杂交;以上检测是分子水平，有时还需进行个体生物学水平的鉴定，如对植物的抗虫抗病特性的鉴定等。;第四步：目的基因的检测和鉴定;基因工程的基本操作程序;将目的基因插人土壤农杆菌的质粒，构建表达载体，通过农杆菌的转化导人香蕉受体细胞，成功转化的香蕉细胞通过组织培养形成植株。 生态安全问题包括： ①外源基因扩散到其他物种（外源基因漂移）； ②转基因植株扩散影响生态系统的结构和功能； ③转基因植株扩散对生物多样性的影响； ④转基因植物残体或分泌物对环境的影响。;cDNA;知识扩展——基因的结构;真核生物基因控制蛋白质合成的过程; 所谓文库，是指一种全体的集合。 基因文库则是指某一生物全部基因的集合。;;表达产物检测：;;四环素 抗性基因;荧光染料标记DNA探针与目的基因杂交