3. 紫外可见分光光度法 2019.ppt

4 Standards标准参数设置 键入标系的样品浓度及名称 * 5 吸光度自动校零 　在开始测试前，需要进行吸光度校零。在样品室参比和样品光路中分别放入空白样品。按按钮 　进行吸光度校零。 6 在wavelength中设定扫描的最大吸收波长， 7 放入标样，选中第一个标样，点Measure依次测定完成 　　　 后自动给出标准曲线。 8 选择SAMPLE进行样品测定，全部测定完后点击END，此时自动生成一个文件，打开此文件，另存为所需的文件名。 9 关机时，先退出UVsolution，再关电脑，最后关光度计上的power。 * 三 注意事项 1. 开机预热15分钟左右。 2. 测定时应注意： 参照池和吸收池应是一对经校正好的匹配的吸收池，材料和规格一致。 已匹配好的比色皿不能用炉子和火焰干燥，不能加热，以免引起光程长度上的改变。 * 3. 测量条件的选择： 选择适宜波长的入射光: 由于有色物质对光有选择性吸收,为了使测定结果有较高的灵敏度, 必须选择溶液最大吸收波长的入射光。 控制吸光度A的准确的读数范围: 由朗伯-比耳定律可知, 吸光度只有控制在0.2~0.8读数范围内时, 测量的准确度较高。 选择参比溶液：参比溶液是用来调节仪器工作零点的。若样品溶液，试剂，显色剂无色可用蒸馏水作参比溶液；反之应采用不加显色剂的样品液作参比溶液。 4. 用完后先关程序，再关仪器开关，关电源，关闭计算机。 5. 正确登记，将仪器及实验台擦干净。 * * * * 分光光度计使用注意事项 对仪器工作环境的要求 稳固的工作台 温度、湿度合适 仪器保养和维护方法 仪器工作电源 光源使用注意事项 单色器使用注意事项 正确使用吸收池 * * 比色皿的使用 (1)要根据所使用的波长来选择比色皿。 石英比色皿和普通硅酸盐玻璃比色皿两种。 玻璃——由于吸收紫外UV光，仅适用于可见光区； 石英——适用于紫外和可见光区。 (2)选择配对良好的比色皿。 根据国家检定规程的要求比色皿间的偏差不得超过0.5%，所以比色皿在使用之前，要对比色皿进行透光测定，把偏差小于0.5%的比色皿配对使用。 (3)选择合适厚度的比色皿。 常用比色皿厚度有1、2、3、5、10cm等，在实际分析工作中，通常根据溶液浓度的不同，选用液槽厚度不同的比色皿，使溶液的吸光度控制在0.2～0.8 之间。 (4)对有挥发性的样品，选择带盖比色皿。 1. 比色皿的选择 * * 2. 比色皿的使用方法 (1) 拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。 (2) 不得将光学面与硬物或脏物接触。 (3) 测定有色溶液吸光度时，一定要用有色溶液润洗比色皿内壁几次，以免改变有色溶液的浓度。另外，在测定一系列溶液的吸光度时，通常都按由稀到浓的顺序测定，以减小测量误差。 (4) 盛装溶液时，高度为比色皿的4/5处即可。 (5) 比色皿外壁的水用擦镜纸或细软的吸水纸吸干,以保护透光面。 (6) 凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液，不得长期盛放在比色皿中。 (7) 不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤。 * * * 3. 比色皿的清洗 (1) 每次做完实验时，应立即洗净比色皿。 清洗比色皿时，一般先用水冲洗，再用蒸馏水洗净。 如比色皿被有机物沾污，可用盐酸-乙醇混合洗涤液（1:2）浸泡片刻，再用水冲洗。 不能用碱溶液或铬酸洗液等氧化性强的洗涤液洗比色皿， 以免损坏。 (2) 不能用毛刷清洗比色皿，以免损伤它的透光面。 * * 显色和分析条件的选择 入射光波长的选择 一般应该选择λmax为入射光波长。这样可以提高分析结果的准确度和灵敏度。 如果λmax处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。 * * 浓度测量值的相对误差（Δc/c）不仅与仪器的透光度误差ΔT 有关，而且与其透光度读数T的值也有关。 ΔT =1%，溶液浓度相对误差Δc/c与其透光度T 的关系曲线如右图。 由图可见ΔT =1%，T 在20%～65%之间时，浓度相对误差较小，此为最佳读数范围。 所以要求选择适宜的吸光度范围（0.2-0.8），以使测量结果的误差最小。 2. 吸光度范围的控制 措施： （a）控制溶液的浓度；（b）选择不同厚度的比色皿，改变光程长度。 * *  1. 显色反应 2