Q_350200 ZTJP 005-2019番茄种子纯度检测及丸粒化加工包装技术规程.pdf

番茄种子纯度检测及丸粒化加工包装技术规程 本标准规定了番茄种子纯度的分子检测及加工包装等技术要求。 应用RAPD 、SSR 等分子标记技术，在筛选合适的多态性引物的基础上，通 过快速提取DNA 、PCR 扩增和凝胶电泳分析，建立一套简单、快速、准确的番 茄种子纯度检测的技术体系。 建立番茄种子的加工、包装、记录及信息跟踪等技术体系，改善种子的物理 特性、提高种子品质，同时做好种子加工及运输售后的信息数据跟踪，杜绝质量 事故的发生。 1 分子纯度检测 1.1 DNA 提取 DNA 的提取采用CTAB 法或离心柱法。离心柱法参照所购厂家的说明书， CTAB 法如下： 将待测种子在20 ℃～25 ℃温度下发芽，待下胚轴长约3 cm(约3～5 d)时， 剪取150 mg 种子幼苗放入1.5 ml 离心管中。加入DNA 提取液600 μL和24:1 氯 仿-异戊醇400 μL，振荡混合，静置10 min。室温下10000 r/min 离心5 min 。将 上清液600 μL转入1.5 ml 离心管，加入300 μL冰冷乙醇沉淀DNA 。10000 r/min 离心1 min，倒去上清液，加入70 ％乙醇溶液500 μL，6000 r/min 离心5 min 收 集沉淀。加入500 μLTE 溶液（pH 为8.0 ）或双蒸水溶解DNA 。 1.2 DNA 质量检验 紫外分光光度计测定DNA 的OD260/OD280 值和浓度，或取10 μL(约100～ 200 ng)DNA 于0.8 ％琼脂糖凝胶中电泳，检测DNA 质量。 1.3 PCR 扩增 1.3.1 RAPD 扩增 20 μL的反应体系中含10×buffer 2 μL；10 mmol/L dNTP 0.4 μL，25 μmol/L 10 mer 随机引物0.2 μL，1U Taq DNA 聚合酶，30 ng 模板DNA ，Mg2+浓度2 mmol/L， 反应液上加盖15～20 μL矿物油以防止挥发。 反应程序：94℃预变性1 min；94℃变性50 S，38℃退火90 S ，72℃延伸60 S，40 个循环；72℃10 min ，4 ℃保存。 1.3.2 SSR 扩增 20 μL的反应体系中含10×buffer 2 μL，Mg2+浓度2 mmol/L ，10 mmol/L dNTP 0.4 μL，50 mg/L SSR 上、下游引物各1 μL，1U Taq DNA 聚合酶，40 ng 模板DNA ， 反应液上加盖15～20 μL矿物油以防止挥发。 反应程序：94℃预变性4 min ：94℃变性50 S，64℃退火90 S ，72℃延伸90 s，随后每循环退火温度比上一循环递减1℃，其他不变，共8 循环；94℃ 50 S， 56℃ 90 S ，72℃ 90 S，共30 循环；72℃ 10 min，4 ℃保存。 1.4 扩增片段检测 取15 μL反应产物，加入溴酚蓝为指示剂，在加有溴化乙锭的1.4 ％琼脂糖 凝胶(RAPD)或3 ％琼脂糖凝胶(SSR) 中电泳，利用凝胶成像系统，根据品种的标 准谱带对照鉴别并记录。 2 加工包装 2.1 加工 2.1.1 加工前准备 车间仓库准备：对加工车间及加工后存贮成品种子的仓库进行清洁、消毒、 干燥。 加工设备检修清理：对加工设备完全彻底地检修，保证设备应有的加工能力。 对加工机械进行认真清理。特别是不同品种转换时，对加工机器的关键部位、流 管拐弯处、夹缝等地方更要清理干净，防止混杂。 设备调试：根据种子的性状、大小或者粒径，由质量管理部门和生产加工部 门共同试验调整确定加工筛片规格。通过试运行加工，对种子入料流量、机械设 备的风速、筛的震动频率等进行调整，使其达到加工工艺要求。 2.1.2 种子精选 待加工种子中的附着物和杂质较大、较多，对种子在加工过程中的流动性、 精确性和机械设备运行的安全性有不良影响的，应进行预清选。 清选常采用的清选方式有风筛清选、窝眼清选和比重清选。种子中混杂有茎 叶碎片、脱落颖片、秕粒种子、灰尘等轻质附着物的，采用风筛清选机对其进行 清除。种子中混杂有大小、形状不同的种子和其他杂物，或在颗粒差异较大的同 种种子中，选取一定颗粒大小的种子，采用窝眼清选机进行清选。种子中混杂有 大小、形状相似，但质地不同的种子时，采用比重清选机进行清选。 2.1.3 质量监测 加工过程中应随时检查加工质量，及时处理各种机械故障。要定时对加